優(yōu)化核酸疫苗免疫保護(hù)帕金森病小鼠的泛素蛋白酶體機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究優(yōu)化核酸疫苗對(duì)慢性帕金森病小鼠蛋白酶體免疫保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：將雄性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為PBS模型組、空質(zhì)粒組和優(yōu)化核酸疫苗和疫苗加蛋白酶體抑制劑組。給予MPTP，制備慢性MPTP小鼠模型。然后分別在小鼠后肢脛前肌注射PBS、空質(zhì)粒pVAX1、pVAX1-IL4/SYN-B和pVAX1-IL4/SYN-B核酸疫苗各100ul,共三次。最后一次注射后，于左側(cè)前腦束（iMFB）區(qū),立體注入乳胞素（lactacy

2、stin）.3周后觀察動(dòng)物行為學(xué)，免疫組化（Immunohistochemistry IHC)和western blot(WB)測(cè)酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase TH）；同時(shí)western blot測(cè)泛素(ubiquitin)、突觸核蛋白（Alpha-synuclein a-syn)及20S蛋白酶體（20S proteasome）的表達(dá)；免疫熒光雙標(biāo)測(cè)突觸核蛋白（Alpha-synuclein a-syn)和20

3、S蛋白酶體（20S proteasome）突觸核蛋白（Alpha-synuclein a-syn)和泛素(ubiquitin)共定位及熒光強(qiáng)度情況。
　　結(jié)果：
　　1.行為學(xué)：發(fā)現(xiàn)核酸疫苗組較PBS組、空質(zhì)粒組和疫苗乳胞素組的運(yùn)動(dòng)癥狀明顯改善，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）
　　2.TH的IHC和WB結(jié)果：核酸疫苗組較PBS組、空質(zhì)粒組和疫苗乳胞素組的中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元中TH陽性數(shù)目明顯增多，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0

4、.05）
　　3.WB結(jié)果:核酸疫苗組較PBS組、空質(zhì)粒組和疫苗乳胞素組的20S蛋白酶體（20S Proteasome）蛋白表達(dá)量明顯增加，突觸核蛋白（Alpha-synuclein a-syn）蛋白量明顯減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；同時(shí)優(yōu)化核酸疫苗組與模型組、空質(zhì)粒及乳胞素組相比泛素（ubiquitin）明顯減少。
　　4.免疫熒光雙標(biāo)：突觸核蛋白（Alpha-synuclein a-syn）分別和泛素（ubiq

5、uitin）及20S蛋白酶體（20S Proteasome）在中腦黑質(zhì)的多巴胺神經(jīng)元共定位表達(dá)；優(yōu)化核酸疫苗明組顯減少突觸核蛋白（Alpha-synuclein a-syn）和泛素（ubiquitin）熒光強(qiáng)度與帕金森病模型組相比；優(yōu)化核酸疫苗組明顯增加20S蛋白酶體（20S Proteasome）熒光強(qiáng)度與模型組相比。
　　結(jié)論：研究結(jié)果表明：優(yōu)化核酸疫苗主動(dòng)免疫慢性MPTP帕金森病小鼠模型，產(chǎn)生高效抗體，抗原抗體復(fù)合物激活溶酶