泛素蛋白酶體抑制劑MG132對大鼠早期糖尿病腎病的影響研究.pdf

1、目的：探討泛素蛋白酶體抑制劑MG132對大鼠早期糖尿病腎病的治療作用及其作用可能機制。 方法：①動物模型的建立：將50只Wistar大鼠隨機分為模型組（40只）和陰性對照組（N組，10只）。模型組給予一次性腹腔注射STZ60mg/kg，陰性對照組給予等劑量的枸櫞酸緩沖液腹腔注射。一周后模型組中有35只大鼠空腹血糖大于16.8mmol/L，確定為糖尿病，并隨機選擇30只進行分組。②模型組分組：將30只糖尿病大鼠隨機分為糖尿病對照組

2、（D組）、MG132高濃度處理組（H組）和MG132低濃度處理組（L組），每組均為10只。分別于腹腔注射MG1326周和8周后處死大鼠并納入以下實驗（每個時間點各組大鼠為5只）。③測定空腹血糖和尿白蛋白。④光鏡和電鏡觀察腎臟超微結(jié)構(gòu)變化。⑤蛋白免疫印跡（Western-Blot）法檢測TGF-β、smad7蛋白表達；RT-PCR法檢測纖維連接蛋白（FN）mRNA表達。⑥統(tǒng)計學處理：應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以x±s表示，

3、采用完全隨機方差分析法，P<0.05表示統(tǒng)計學有意義。 結(jié)果：①一般情況：與正常組（N組）比較，各模型組大鼠明顯消瘦，攝食、飲水、尿量增加，毛色欠光澤，精神怠倦。MG132高濃度組（H組）、低濃度組（L組）大鼠一般情況較糖尿病對照組（D組）有所減輕。②體重和空腹血糖結(jié)果：與正常組（N組）比較，各模型組大鼠6周和8周體重明顯減輕，空腹血糖顯著升高（P<0.01）；經(jīng)MG132處理后MG132高濃度組（H組）、低濃度組（L組）大鼠體

4、重較糖尿病對照組增加（P<0.05）；糖尿病對照組（D組）大鼠8周體重較6周減少（P<0.05），MG132高、低濃度組8周體重較6周增加（P<0.05）。③腎臟重量、腎重指數(shù)變化：與正常組相比，各模型組大鼠腎臟重量及腎重指數(shù)明顯增加（P<0.05）； MG132高濃度組（H組）、低濃度組（L組）大鼠腎臟重量及腎重指數(shù)較糖尿病對照組（D組）減少（P<0.05）。④尿量、尿微量白蛋白、尿蛋白濃度／尿肌酐濃度比值：與正常組（N組）相比，各模

5、型組大鼠6周和8周24小時尿量、尿微量白蛋白及尿蛋白濃度／尿肌酐濃度比值均增加（P<0.01）；經(jīng)MG132處理后，H、L組大鼠24小時尿微量白蛋白及尿蛋白濃度／尿肌酐濃度比值較糖尿病對照組減少（P<0.05）。⑤血尿素氮與肌酐結(jié)果：與正常組（N組）比較，各模型組大鼠6周、8周血肌酐減少（P<0.01），血尿素氮增加（P<0.01）；與糖尿病對照組（D組）相比，MG132高濃度組（H組）、低濃度組（L組）大鼠血肌酐增加（P<0.05），

6、血尿素氮減少（P<0.05）。⑥.光鏡和電鏡檢查結(jié)果：光鏡下各模型組大鼠腎小球體積明顯增大，其中以糖尿病對照組最為顯著；電鏡下各模型組大鼠均可見部分基底膜不規(guī)則增厚，足突間隙增寬或融合，內(nèi)皮細胞水腫等。以上改變在H組、L組較D組輕，H組較L組輕。⑦.大鼠腎臟組織smad7和TGF-β蛋白表達含量變化：與正常組（N組）比較，糖尿病對照組（D組）大鼠腎臟smad7蛋白表達降低（P<0.01），TGF-β蛋白表達增加（P<0.01）；經(jīng)MG1

7、32處理后，與糖尿病對照組（D組）比較，MG132高、低濃度組TGF-β表達減少（P<0.01），smad7表達增加（P<0.01）；MG132高濃度組TGF-β表達量較MG132低濃度組減少（P<0.05），smad7表達較MG132低濃度組增加（P<0.05）；隨時間延長，8周與6周間差異愈加顯著（P<0.05）。⑧，腎組織FNmRNA表達變化：與正常組（N組）相比，糖尿病對照組（D組）大鼠腎臟FN mRNA表達明顯增加（P<0.0

8、5）；MG132高濃度組（H組）和MG132低濃度組（L組）大鼠腎臟FNmRNA表達較糖尿病對照組（D組）減少（P<0.05）。 結(jié)論：1.MG132可以減少DN大鼠尿蛋白及腎臟TGF-β蛋白、FNmRNA的表達，增加smad7蛋白的表達，減輕腎臟基底膜增厚、內(nèi)皮細胞水腫及足突損傷等病理改變，對糖尿病腎病具有部分治療作用。2.泛素蛋白酶體途徑對smad7蛋白的降解增加可能參與了糖尿病腎病的發(fā)病過程，有效抑制泛素蛋白酶體途徑的活性