蛋白酶體功能下降在帕金森病發(fā)病機制中的作用.pdf

1、目的：觀察蛋白酶體抑制劑誘導(dǎo)大鼠黑質(zhì)變性伴包涵體形成及運動行為改變，探討蛋白酶體功能下降在帕金森病發(fā)病機制中的作用。 方法：(1)將蛋白酶體抑制劑Lactacystin10μg/2μl立體定向注射入大鼠左側(cè)黑質(zhì)致密部，對照組注射等體積的生理鹽水；(2)觀察大鼠自主行為和阿樸嗎啡誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)行為的改變；(3)開野實驗觀察大鼠自發(fā)運動行為改變，檢測指標(biāo)：總跑動時間、總停息時間、下肢站立次數(shù)、穿梭距離、大鼠自發(fā)向左側(cè)或右側(cè)行1/4弧度的

2、環(huán)形活動的次數(shù)、下肢站立時左側(cè)或右側(cè)前肢倚靠箱壁的次數(shù)和大鼠軀干左側(cè)或右側(cè)靠近箱壁進行探究活動的次數(shù)；(4)HE染色法觀察黑質(zhì)致密部病理改變；(5)Nissl染色法觀察黑質(zhì)致密部病理改變；(6)免疫組織化學(xué)法觀察黑質(zhì)致密部酪氨酸羥化酶免疫陽性細(xì)胞形態(tài)改變，并對酪氨酸羥化酶免疫陽性細(xì)胞進行計數(shù)；(7)免疫組織化學(xué)法觀察黑質(zhì)致密部神經(jīng)元內(nèi)α-共核蛋白量及分布形式的改變；(8)免疫組織化學(xué)法觀察紋狀體內(nèi)酪氨酸羥化酶免疫陽性神經(jīng)纖維數(shù)目的改變；

3、(9)透射電鏡觀察黑質(zhì)致密部及紋狀體超微結(jié)構(gòu)的改變。 結(jié)果：(1)Lactacystin組大鼠給藥1周后出現(xiàn)自發(fā)性活動減少，動作緩慢，震顫、對外界刺激不自主豎毛，且癥狀逐步加重；阿樸嗎啡可誘導(dǎo)出向健側(cè)的旋轉(zhuǎn)運動，3周后的30分鐘旋轉(zhuǎn)次數(shù)為266.92±9.19。(2)Lactacystin組大鼠的總跑動時間、總停息時間、下肢站立次數(shù)及穿梭距離與生理鹽水組大鼠相比減少(p<0.05)，Lactacystin組大鼠自發(fā)向左側(cè)1/4弧

4、度的環(huán)形活動的次數(shù)、下肢站立時左側(cè)前肢倚靠箱壁的次數(shù)及大鼠軀干左側(cè)靠近箱壁進行探究活動的次數(shù)與右側(cè)相比增多(p<0.05)；(3)HE染色法觀察Lactacystin組大鼠左側(cè)黑質(zhì)致密部神經(jīng)元數(shù)目減少，呈變性改變，神經(jīng)元胞膜不完整，結(jié)構(gòu)不清，胞漿內(nèi)可見嗜伊紅包涵體，膠質(zhì)細(xì)胞增多：(4)Nissl染色法觀察Lactacystin組大鼠左側(cè)黑質(zhì)致密部神經(jīng)元數(shù)目減少，Nissl體染色較淡，結(jié)構(gòu)松散；(5)Lactacystin組大鼠左側(cè)黑質(zhì)致

5、密部TH免疫陽性神經(jīng)元數(shù)量少，胞體皺縮變小，結(jié)構(gòu)不清，細(xì)胞數(shù)較右側(cè)減少了81.33％(p<0.05)；(6)Lactacystin組大鼠左側(cè)黑質(zhì)致密部神經(jīng)元胞漿內(nèi)α-共核蛋白量增加，呈聚集樣表現(xiàn)，胞漿濃染，可見數(shù)個圓形或橢圓形包涵體樣濃聚物，α-共核蛋白免疫反應(yīng)呈強陽性；(7)Lactacystin組大鼠右側(cè)紋狀體TH免疫陽性纖維密集，平均光密度值為0.2165±0.0017；左側(cè)TH免疫陽性纖維數(shù)量減少，分布稀疏，平均光密度值為0.0

6、406±0.0006，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.05)；(8)電鏡下，Lactacystin組大鼠左側(cè)黑質(zhì)致密部神經(jīng)元數(shù)量稀少，多數(shù)殘存神經(jīng)元呈現(xiàn)凋亡征象：髓鞘出現(xiàn)松散、斷裂，偶可見髓殼變薄，突起膨脹變粗，內(nèi)含大量類圓形電子致密物；電子致密物有一個致密核心，周圍為同心圓排列的纖維蛋白絲樣結(jié)構(gòu)，可能為突起內(nèi)蛋白質(zhì)聚集的電鏡表現(xiàn)。個別膠質(zhì)細(xì)胞亦呈現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。Lactacystin組大鼠左側(cè)紋狀體內(nèi)神經(jīng)纖維數(shù)量減少，殘存纖維的髓鞘出現(xiàn)松散