母系遺傳糖尿病家系線粒體基因突變的研究.pdf

1、目的：線粒體基因突變糖尿病(mitochondrialdiabetesmellitus，MDM)是一種單基因致病突變母系遺傳疾病，屬于特殊類型糖尿病，其發(fā)病原因?yàn)棣录?xì)胞功能缺陷，最早發(fā)現(xiàn)且研究較多的突變類型是線粒體tRNA亮氨酸基因中的3243位點(diǎn)A到G的轉(zhuǎn)換，其影響胰島B細(xì)胞氧化磷酸化，抑制胰島素分泌。線粒體基因缺陷賦予了個(gè)體一定的糖尿病遺傳易感性。本試驗(yàn)旨在對(duì)符合母系遺傳等條件的糖尿病家系成員，在選定段基因(np3069-3842)

2、區(qū)域?qū)σ阎?個(gè)常見突變位點(diǎn)(np3243、3316、3394)進(jìn)行篩查，觀察突變與糖尿病之間的關(guān)系，指導(dǎo)糖尿病的正確分類，對(duì)線粒體糖尿病早期診斷和積極預(yù)防。 方法：選擇14個(gè)糖尿病家系(42例)及無(wú)糖尿病家族史的散發(fā)糖尿病患者(43例)，受試者測(cè)量身高、體重、腰圍、臀圍、血糖、胰島素，抽取外周血3ml，2％EDTA抗凝，用改良酚氯仿法提取白細(xì)胞總DNA，用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法對(duì)全部受試者的線粒體DNA的3069-3842區(qū)

3、域基因擴(kuò)增，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)檢測(cè)，將酶切后電泳條帶不同于野生型的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，確定突變位點(diǎn)。 結(jié)果：1、線粒體基因突變PCR產(chǎn)物的RFLP分析PCR產(chǎn)物為774bp，無(wú)突變者酶切產(chǎn)物為233bp、180bp、169bp、97bp、79bp、15bp。3243A→G突變多出3245位點(diǎn)，酶切產(chǎn)物為233bp、180bp、97bp兩條、79bp、72bp。3316G→A突變沒有3317位點(diǎn)，酶切

4、產(chǎn)物為266bp、233bp、180bp、79bp、15bp。3394T→C突變，多出3393酶切位點(diǎn)，酶切產(chǎn)物為233bp、180bp、169bp、79bp、76bp、21bp、15bp。經(jīng)分析發(fā)現(xiàn)1號(hào)家系，先證者的丈夫攜帶有63316A突變，7號(hào)家系先證者的妻子和女兒攜帶有T3394C突變，他們均為健康攜帶者，空腹及餐后血糖、胰島功能均正常。散發(fā)對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)突變。2、DNA序列分析采用blast軟件進(jìn)行序列比對(duì)，結(jié)果表明所擴(kuò)增片段的

5、序列為線粒體3069-3842之間的序列，對(duì)PCR-RFLP檢測(cè)呈陽(yáng)性的標(biāo)本和部分陰性標(biāo)本進(jìn)行DNA序列測(cè)定，分別證實(shí)G3316A突變和T3394C突變，DNA的測(cè)序結(jié)果與PCR-RFLP分析結(jié)果一致。 結(jié)論：1、母系遺傳糖尿病線粒體轉(zhuǎn)移核糖核酸亮氨酸t(yī)RNALeu(UURA3243G點(diǎn)突變發(fā)生率較低；2、線粒體np3394T→C突變及np3316G→A突變可見于無(wú)糖耐量異常的人群中；3、遺傳表型疑似線粒體糖尿病的患者與PCR-