45歲以下發(fā)病的糖尿病患者線粒體基因突變研究.pdf

1、目的:近年來(lái),糖尿病的流行呈現(xiàn)兩種趨勢(shì):發(fā)病率逐年增加;發(fā)病人群年輕化;關(guān)于早發(fā)糖尿病的病因研究已受到各國(guó)學(xué)者的關(guān)注,已知線粒體基因突變參與了糖尿病的形成.該研究旨在改進(jìn)實(shí)驗(yàn)方法,探討天津地區(qū)早發(fā)糖尿病患者mtDNAtRNA<'Leu(UUR)>np3243、ND1區(qū)np3316,np3394,np3426及ND4區(qū)np12026的突變情況.方法:隨機(jī)入選348例無(wú)親緣關(guān)系、發(fā)病年齡≤45歲的糖尿病患者(男201例;女147例;年齡42

2、.92±12.24歲),207例無(wú)親緣關(guān)系的非糖尿病對(duì)照(男116例;女91例;年齡44.07±8.67歲):1)收集其相關(guān)臨床資料;2)取其清晨空腹靜脈抗凝血,以常規(guī)蛋白酶K快速裂解法提取外周血白細(xì)胞基因組DNA;同時(shí)以類(lèi)似方法提取其中20例血漿游離DNA(包括經(jīng)前一種方法確定的有無(wú)突變樣本各10例);3)應(yīng)用PCR-RFLP篩查包括A3243G在內(nèi)的5個(gè)突變位點(diǎn),陽(yáng)性樣本最后經(jīng)PCR產(chǎn)物直接測(cè)序證實(shí).對(duì)于低異性的A3243G突變,采

3、取克隆-PCR-RFLP篩選、鑒定突變型mtDNA,最后菌液/質(zhì)粒測(cè)序證實(shí),為相關(guān)研究提供陽(yáng)性對(duì)照;4)對(duì)4例具有突變的先證者進(jìn)行家系研究,分析其遺傳及臨床特征;5)用經(jīng)測(cè)序證實(shí)的3243突變純合菌株質(zhì)粒DNA配制含不同突變比例的mtDNA模板,PCR-RFLP初步分析常規(guī)方法的異質(zhì)性檢測(cè)靈敏度,為類(lèi)似研究實(shí)驗(yàn)方法的選取提供參考;結(jié)論:該研究中早發(fā)糖尿病患者存在多種線粒體基因突變,這些突變協(xié)同作用,共同致病.其中mtDNA ND1區(qū)3個(gè)