煙草鐵蛋白基因表達增強與抑制的效應(yīng).pdf

1、鐵蛋白是一種大的蛋白質(zhì)外殼，能以一種安全、無毒的形式儲存多達4500個鐵原子，廣泛存在于動植物中。本研究以煙草為受體，以兩個煙草鐵蛋白基因(NtFer1 andNtFer2，GenBank accession number: AY083924, AY141105)為目標基因，構(gòu)建鐵蛋白表達增強與表達抑制的植物表達載體，用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化煙草SR-1 strain，研究鐵蛋白基因表達增強與沉默的效應(yīng)，從而研究鐵蛋白基因的功能，為其在植物基

2、因工程育種中的應(yīng)用提供依據(jù)。
　　用RT-PCR方法從煙草(Nicotiana tabacum)中克隆出兩個鐵蛋白基因，將其亞克隆到植物表達載體pBI121中，構(gòu)建兩個鐵蛋白基因的正義和反義表達載體.利用農(nóng)桿菌（Agro bacterium tumefaciens）介導法將正義反義鐵蛋白基因?qū)霟煵莼蚪M，培育轉(zhuǎn)基因煙草。對轉(zhuǎn)基因煙草T1代植株的卡那霉素抗性分析表明，多數(shù)轉(zhuǎn)基因植株后代表現(xiàn)為3∶1的分離比例，少數(shù)轉(zhuǎn)基因植株的抗性分

3、離表現(xiàn)為15∶1或不符合孟德爾遺傳分離比例。說明整合到煙草基因組內(nèi)的外源基因多為單拷貝基因，少數(shù)為多拷貝基因。對T1代植株進行PCR檢測證明:兩個鐵蛋白基因的正義反義序列已經(jīng)整合到煙草基因組中，并且可以通過有性生殖傳遞給后代。Northern雜交分析表明正義表達鐵蛋白基因不同程度上提高了鐵蛋白基因mRNA的含量，而反義表達鐵蛋白基因在不同程度上降低了鐵蛋白基因mRNA的含量。
　　分析四個轉(zhuǎn)基因群體T1代在高濃度鐵離子和低濃度鐵離