42516.人轉(zhuǎn)鐵蛋白在轉(zhuǎn)基因動物中表達的研究

1、上海交通大學(xué)博士學(xué)位論文人轉(zhuǎn)鐵蛋白在轉(zhuǎn)基因動物中表達的研究姓名：顏景斌申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：曾溢滔20070510人轉(zhuǎn)鐵蛋白在轉(zhuǎn)基因動物中表達的研究2另外，初步的結(jié)果顯示慢病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因小鼠制備方法不僅整合效率比原核顯微注射高近3倍，而且人轉(zhuǎn)鐵蛋白的平均表達水平明顯高于顯微注射獲得的小鼠。但外源基因在小鼠各臟器中的表達模式兩者之間沒有明顯的差異，均主要在肝臟和乳腺中表達，心臟、腎臟等其它臟器僅有較低的表

2、達。與此同時，本文還對利用細胞體外轉(zhuǎn)染和體細胞核移植技術(shù)制備的轉(zhuǎn)基因克隆胎牛中人轉(zhuǎn)鐵蛋白基因整合、表達情況進行了分析。結(jié)果證實外源基因以單拷貝的形式整合在?；蚪M中，整合位點離最近的一個牛功能基因約220Kb，而人轉(zhuǎn)鐵蛋白主要在肝臟中檢出了表達。另外，本文分別設(shè)計了兩條針對小鼠β酪蛋白基因和三條針對乳清酸蛋白基因的干擾載體，將這些載體分別注射哺乳期的人轉(zhuǎn)鐵蛋白轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺。結(jié)果顯示大部分干擾載體不僅能有效降低小鼠內(nèi)源性乳蛋白的表達水平

3、，而且在一定程度上提高了外源人轉(zhuǎn)鐵蛋白的表達，最高的提高了近一倍。同時通過顯微注射的方法制備了整合干擾載體的轉(zhuǎn)基因小鼠，對1只已進入泌乳期的小鼠分析顯示內(nèi)源性β酪蛋白相對濃度僅為正常小鼠的約70％。本文系統(tǒng)地分析了不同調(diào)控元件對人轉(zhuǎn)鐵蛋白在動物各臟器中表達的調(diào)節(jié)作用，為這些調(diào)控元件的功能研究提供了科學(xué)的數(shù)據(jù)，并獲得了一批可在乳汁和血漿中高效表達人轉(zhuǎn)鐵蛋白的轉(zhuǎn)基因動物。同時采用干擾內(nèi)源性乳蛋白的方法來提高外源基因表達水平，為乳腺生物反應(yīng)器