人胸腺素α1基因及乳鐵蛋白基因在番茄中表達(dá)的研究.pdf

1、本研究首先根據(jù)植物偏愛(ài)密碼子優(yōu)化了人Tα1基因的核苷酸序列，然后人工合成了Tα1基因。由于Tα1基因非常小，為了增加其在植物中的表達(dá)量，我們嘗試將它首尾相連形成四聯(lián)體Tα1④，每個(gè)單體之間由腸激酶識(shí)別位點(diǎn)編碼序列隔開(kāi)，表達(dá)出的四聯(lián)體小肽通過(guò)口服進(jìn)入腸道后會(huì)被腸激酶分解成單體小肽而發(fā)揮作用。Tα1基因、Tb1④基因及經(jīng)過(guò)密碼子優(yōu)化的lf基因被克隆到雙元載體pBI121中，構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBI121Tα1、pBI121Tα1④、pBI1

2、21LF。同時(shí)我們還根據(jù)已報(bào)道的番茄果實(shí)成熟過(guò)程中受乙烯調(diào)控的果實(shí)特異性表達(dá)的E8基因啟動(dòng)子序列設(shè)計(jì)了引物，克隆了番茄中蔬5號(hào)的E8啟動(dòng)子，并構(gòu)建了由E8啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)lf基因表達(dá)的載體pBIE8LF，以及分別由CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)Tα1基因和lf基因基因表達(dá)的雙價(jià)植物表達(dá)載體pBITL。構(gòu)建好的植物表達(dá)載體利用凍融法轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌菌株LBA4404中，并侵染了番茄子葉外植體，經(jīng)過(guò)卡那霉素篩選，最終得到了再生植株67株?！　∞D(zhuǎn)基因番茄中表