家兔腹側(cè)腦橋A5區(qū)在低氧后呼吸頻率下降中的作用.pdf

1、目的通過電刺激家兔腹側(cè)腦橋觀察呼吸的變化，并觀察腹側(cè)腦橋內(nèi)顯微注射N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體激動(dòng)劑L．谷氨酸鈉(L-glutamate)和拮抗劑2-氨基-5-磷酸戊酸(AP-5)及α2腎上腺素受體激動(dòng)劑去甲腎上腺素(NE)對(duì)急性缺氧引起的呼吸作用的影響，探討NMDA受體和α2腎上腺素受體在低氧后呼吸頻率下降中的作用；并進(jìn)一步應(yīng)用免疫組織化學(xué)的方法，研究腹側(cè)腦橋NMDA受體活化后的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞過程中酪氨酸蛋白激酶途徑的作用。

2、 方法1、電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)：(1)電刺激：實(shí)驗(yàn)在56只健康成年家兔上進(jìn)行，電刺激頻率100Hz，強(qiáng)度20～50μA及強(qiáng)度50～80μA，波寬0.3ms，串長(zhǎng)3s。刺激后注射L-glutamate，觀察膈種經(jīng)放電積分幅值、呼氣時(shí)間和吸氣時(shí)間的變化。(2)微量注射：健康成年家兔45只，隨機(jī)分成5組，選取有效結(jié)果30只：A組(n=6)：注射生理鹽水；B組(n=6)：注射L-glutamate：C組(n=6)：注射AP-5；D組(n=6)：注

3、射NE；E組：不注射(n=6)。分離膈神經(jīng)，記錄膈神經(jīng)放電，所有家兔注射藥物前記錄常氧狀態(tài)下的放電作為F組(n=30)。暴露腦干背側(cè)面人字縫部；觀察和分析腹側(cè)腦橋微量注射NMDA受體激動(dòng)劑L-glutamate和拮抗劑AP-5及a2腎上腺素受體激動(dòng)劑NE后，在急性缺氧狀態(tài)下膈神經(jīng)放電積分幅值、呼氣時(shí)間和呼吸頻率的變化。 2、免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)：健康成年家兔24只，隨機(jī)分成4組：A組(n=6)：注射生理鹽水；B組(n=6)

4、：注射L-glutamate；C組(n=6)：注射AP-5：D組(n=6)：不注射。A、B、C組動(dòng)物急性缺氧后快速處死，D組動(dòng)物直接處死，迅速取出腦干，以10％福爾馬林PBS溶液浸泡固定腦組織，石蠟包埋后進(jìn)行切片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法SP法研究和分析各組家兔腹側(cè)腦橋神經(jīng)元細(xì)胞的酪氨酸磷酸化的Src酪氨酸蛋白激酶的表達(dá)情況。 結(jié)果電生理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：(1)以100Hz，30μA刺激腹側(cè)腦橋呼氣時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.01)，膈神經(jīng)放電

5、積分幅值以及吸氣時(shí)間沒有明顯改變；以100Hz，80μA刺激腹側(cè)腦橋呼氣時(shí)間明顯延長(zhǎng)(P<0.001)，膈神經(jīng)放電積分幅值以及吸氣時(shí)間沒有明顯改變。腹側(cè)腦橋注射L-glutamate后，呼氣時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.01)，膈神經(jīng)放電積分幅值以及吸氣時(shí)間沒有明顯變化；(2)注射L-glutamate后動(dòng)物缺氧后的呼吸頻率減慢、呼氣時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.01)和膈神經(jīng)放電積分幅值沒有顯著變化；(3)注射AP-5后動(dòng)物缺氧后的呼吸頻率增快、呼氣時(shí)間縮短

6、(P<0.01)和膈神經(jīng)放電積分幅值沒有明顯改變；(4)注射NE后動(dòng)物缺氧后的呼吸頻率減慢、后期呼氣時(shí)間延長(zhǎng)(P<0.01)和膈神經(jīng)放電積分幅值沒有顯著變化。 免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示：(1)各組動(dòng)物的腹側(cè)腦橋切片上中均有酪氨酸磷酸化的Src酪氨酸激酶免疫反應(yīng)陽性的細(xì)胞表達(dá)；(2)B組表達(dá)最強(qiáng)，依次是A組和C組，D組陽性反應(yīng)最弱；(3)統(tǒng)計(jì)分析顯示各組之間的兩兩比較均有顯著性差異(P<0.01) 結(jié)論本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在腹側(cè)

7、腦橋上既有NMDA受體也有α2腎上腺素受體。在成年麻醉的家兔，急性低氧后呼吸頻率的短暫下降依賴于腹側(cè)腦橋的NMDA和α2腎上腺素受體，即兩種受體在急性缺氧后的呼吸頻率下降中都發(fā)揮了作用。 免疫組織化學(xué)結(jié)果表明，腹側(cè)腦橋神經(jīng)元上NMDA受體活化后的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)過程中，通過酪氨酸激酶途徑發(fā)揮作用，表明了酪氨酸激酶途徑在缺氧信號(hào)傳導(dǎo)中有重要意義。對(duì)于腹側(cè)腦橋神經(jīng)元上的NMDA受體活化后是否還有其它信號(hào)途徑介導(dǎo)缺氧信號(hào)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)