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文檔簡介
1、目的:心律失常至今仍是一種發(fā)病率和死亡率很高的疾病。積極探索心律失常的發(fā)生機制和尋求安全、高效的抗心律失常治療是當今的研究熱點。伊布利特(Ibutilide)是一種新近推出的Ⅲ類抗心律失常藥物,對房性、室性心律失常的治療均有顯著效果,臨床應(yīng)用中在少數(shù)患者出現(xiàn)藥物性心律失常,最為嚴重的是尖端扭轉(zhuǎn)性室速(Tdp)。L-型鈣通道電流(ICa-L)是心肌細胞電活動和機械活動的重要離子流,生理情況下主要參與心室肌等快反應(yīng)細胞的動作電位復(fù)極2相平臺
2、期的形成從而影響動作電位時程和心肌的有效不應(yīng)期。本研究利用Langendorff灌流裝置,采用酶解法分離兔單個左室前壁中層心肌細胞(M細胞),分別配制伊布利特終濃度為10-5mol/L和10-6mol/L的細胞外液灌流細胞,應(yīng)用膜片鉗全細胞記錄方法,以觀察正常心室肌L-型鈣通道電流(ICa-L)活性的變化,從細胞水平探討伊布利特抗心律失常的離子機制及出現(xiàn)藥物性心律失常的電生理基礎(chǔ)。 材料與方法: 1.實驗動物:新西蘭純種
3、大耳白兔40只,由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供,雌雄不拘,體重2.0~2.5kg。 2.細胞分離:猝擊兔頭顱枕部致昏,迅速開胸切取心臟,置于冰冷的無鈣臺氏液中,剪去心包,心臟經(jīng)修飾后連接在Langendorff心臟灌流裝置上,經(jīng)主動脈根部逆行用無鈣臺氏液和0.4mg/ml膠原酶液灌流,準確分離剪碎左心室前壁中層心肌細胞,定位方法:用眼科剪分別剪去左室心內(nèi)膜下<1.5mm和心外膜下<1.5mm的組織,剩余中間部分以外科手術(shù)刀片刮除
4、殘余心內(nèi)膜和外膜細胞后為中層細胞,用0.2mg/ml膠原酶液孵化細胞,同時充100%O2,分離出較多的紋理清晰長方形的細胞后放在存儲液內(nèi)保存。1~2小時后以CaCl2溶液分3次復(fù)鈣使細胞外液鈣離子濃度至1.8mmol/L,即可備用。 3.藥物:伊布利特純品由北京紅惠生物制藥股份有限公司贊助,膠原酶、HEPES、去脂肪酸的牛血清蛋白(BSA)等由Sigma公司生產(chǎn),余為國產(chǎn)分析純。膠原酶、BSA、ATP-Na2保存在4℃冰箱。伊布
5、利特液:伊布利特10mg(相當于伊布利特8.7mg),三水醋酸鈉18.9mg,氯化鈉890mg,用鹽酸調(diào)整PH約4.6和注射用水適量加至100ml。 4.電流記錄:應(yīng)用膜片鉗全細胞記錄方法,記錄10-6mol/L及10-5mol/L伊布利特外液對正常左室前壁中層細胞鈣電流活性的變化,與正常對照組進行比較、分析。電流記錄的刺激程序由pulse+pulsefit軟件控制,通道信號經(jīng)EPC-9膜片鉗放大器放大,通過Ag-AgCl電極絲
6、和填充電極內(nèi)液的微電極導(dǎo)入細胞,產(chǎn)生的電流信號經(jīng)EPC-9轉(zhuǎn)換,為pulse+pulsefit軟件收集、分析。 5.統(tǒng)計學(xué)分析:以單個細胞作為統(tǒng)計單位,應(yīng)用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標準差(-x±s)表示,首先進行組間均衡性檢驗,兩組計量資料采用t檢驗,成組資料間比較采用方差分析,以P<0.05為有顯著性差異的標準。 結(jié)論: 1.本研究觀察了兔正常左室前壁中層心肌細胞ICa-L電流在不
7、同濃度伊布利特灌流后的變化,包括激活、失活、失活后再恢復(fù),并與CON組心室肌細胞進行了對比分析。 2.伊布利特呈濃度依賴性的促進ICa-L電流,包括Ⅰ-Ⅴ曲線下移,ICa-L電流密度增大,失活曲線右移,失活后再恢復(fù)增快,提示兔正常左室前壁中層心肌細胞的L-型鈣通道活性在伊布利特作用后受到促進。但ICa-L電壓依賴性不變,對激活電位、峰值電位、反轉(zhuǎn)電位及Ⅰ-Ⅴ曲線的形態(tài)軌跡均無影響。與伊布利特治療臨床上常見的由于由于鈣電流抑制引起
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