伊布利特對兔右室心肌細(xì)胞快鈉離子通道的影響.pdf

1、目的：室性心律失常是臨床上的常見病、多發(fā)病，而源自右心室的心律失常有很重要的臨床意義，多數(shù)發(fā)生于30歲左右青年人的心源性猝死與之相關(guān)。而關(guān)于右室心肌細(xì)胞鈉通道的研究卻未見報(bào)道。盡管非藥物治療心律失常進(jìn)展迅速，但抗心律失常藥物仍然是目前心律失常治療的主要手段。近年來研究表明新型Ⅲ類抗心律失常藥物--伊布利特，主要通過延長動作電位和有效不應(yīng)期來終止折返激動，在多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)中證明有快速轉(zhuǎn)復(fù)房顫、房撲的作用而成為治療心律失常的主要藥物之一。有動

2、物實(shí)驗(yàn)表明，伊布利特可以通過延長心室不應(yīng)期，抑制室性心律失常的發(fā)生。本研究以酶解法分離新西蘭大白兔右室心肌細(xì)胞，采用全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù)記錄不同濃度伊布利特對右室心肌細(xì)胞快鈉通道的影響，從而探討其抗室性心律失常的部分離子通道機(jī)制。 材料與方法： 1.實(shí)驗(yàn)動物：新西蘭純種大耳白兔60只，購自河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，雌雄不拘，體重1.5～2.0 kg。隨機(jī)抽取10只兔作為正常對照組(Con)，25只兔作為伊布利特低濃度組(

3、10-6mmol/L)，25只兔作為伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)。 2.細(xì)胞分離：利用酶解(膠原酶I，Sigma公司)的方法分離右室心肌細(xì)胞。 3 電流記錄和數(shù)據(jù)分析：應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄方法，記錄伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)及低濃度組(10-6mmol/L)干預(yù)下右室心肌細(xì)胞INa活性的變化，并與正常對照組進(jìn)行比較分析。電流記錄的刺激程序由pulse+ pulsefit軟件控制，通道信號經(jīng)EPC-9膜片

4、鉗放大器放大，通過Ag-AgCl電極絲和填充電極內(nèi)液的微電極導(dǎo)入細(xì)胞，產(chǎn)生的電流信號經(jīng)EPC-9轉(zhuǎn)換，為pulse+ pulsefit軟件采集、分析，采用SPSS13.0軟件包作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 1.伊布利特對右室心肌細(xì)胞INa I-V曲線的影響觀察三組細(xì)胞INa的I-V曲線，均在-70 mV激活，-20 mV達(dá)峰值，+50 mV時(shí)反轉(zhuǎn)。應(yīng)用伊布利特干預(yù)組與對照組相比，I-V曲線上移，以伊布利特高濃度組(10-5mm

5、ol/L)上升更明顯。但I(xiàn)Na電壓依賴性不變，對激活電位、峰值電位、反轉(zhuǎn)電位及I-V曲線的形態(tài)軌跡均無影響。INa峰值電流密度(-20 mV)的比較顯示：對照組為-45.77±4.62pA/pF(n=10 cells)，伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)為-29.74±3.79pA/pF(n=10 cells)，峰值電流密度較對照組下降了35.02％，(P＜0.001)；伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)INa峰值電流密度為

6、-18.32±2.82pA/pF(n=10cells)，該組INa峰值電流密度的下降更明顯，較對照組下降了59.97％，(P＜0.001)。伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)與低濃度組(10-6mmol/L)相比較，INa峰值電流密度低濃度組(10-6mmol/L)比高濃度組(10-5mmol/L)高，(P＜0.05)。 2.伊布利特對右室心肌細(xì)胞INa穩(wěn)態(tài)失活曲線的影響INa電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線，伊布利特高濃度組(10

7、-5mmol/L)、伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)與正常對照組相比，失活曲線明顯左移(即向超極化方向移動)，以伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)左移更加明顯。最大半數(shù)失活電壓(V0.5)對照組為-75.08±3.9mV(n=10 cells)，伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)V0.5為-92.72±4.4 mV(n=10cells)，與對照組和伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)比較均相差顯著，(P<0.00

8、1)；伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)為-103.58±4.6 mV(n=10 cells)，與對照組比較有非常顯著的差異，(P<0.001)。 3.伊布利特對右室心肌細(xì)胞INa失活后再恢復(fù)曲線的影響三組細(xì)胞INa失活后再恢復(fù)過程，當(dāng)兩個(gè)脈沖間隔時(shí)間為15 ms時(shí)，對照組INa恢復(fù)60.28％，伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)僅恢復(fù)34.52％，而伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)恢復(fù)39.28％，而當(dāng)兩個(gè)

9、脈沖間隔時(shí)間為75 ms時(shí)，對照組恢復(fù)100％，而伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)僅恢復(fù)68.51％，伊布利特低濃度組(10-6mmol/L)恢復(fù)74.80％。說明布利特高濃度組(10-5mmol/L)和低濃度組(10-6mmol/L)INa再恢復(fù)明顯減慢，再恢復(fù)時(shí)程延長，和對照組比較有顯著性差別，P值分別P<0.001和P<0.05。 結(jié)論： 1.本課題通過研究伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)、低濃度組

10、(10-6mmol/L)對右室心肌細(xì)胞快鈉離子通道電流的影響，并與對照組相比。結(jié)果顯示，伊布利特干預(yù)后右室心肌細(xì)胞發(fā)生了一系列心電學(xué)方面的變化，如INa電流活性降低，顯示伊布利特抑制0相快鈉電流，心肌細(xì)胞膜離子通道的異常活動，可引起膜電位降低、動作電位0位相上升速率下降、動作電位時(shí)程及心室有效不應(yīng)期延長，減慢傳導(dǎo)終止折返，這可能是伊布利特抗室性心律失常的部分離子通道機(jī)制。 2.伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)與低濃度組

11、(10-6mmol/L)相比較，伊布利特高濃度組(10-5mmol/L)對INa的抑制作用更為明顯。兩組相比，INa電流.電壓關(guān)系曲線(Ⅰ-Ⅴ曲線)、INa電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線、INa失活后再恢復(fù)曲線的變化有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示伊布利特的藥理作用在一定范圍內(nèi)呈現(xiàn)劑量依賴性，這與臨床上隨著劑量的增加伊布利特轉(zhuǎn)復(fù)心律失常的時(shí)間縮短相一致，INa電壓依賴性穩(wěn)態(tài)失活曲線左移，說明該藥物的作用也呈電壓依賴性。 3.國內(nèi)外有研究報(bào)道伊布利特對