益母草堿對(duì)大鼠心肌細(xì)胞離子通道作用的研究.pdf

1、益母草堿是傳統(tǒng)中藥益母草中的一種生物堿,幾千年來(lái)用于治療婦女痛經(jīng)、月經(jīng)不調(diào)及其他婦科疾病。研究發(fā)現(xiàn)益母草堿具有廣泛的藥理活性。近年來(lái)在國(guó)內(nèi),有不少以益母草為主要成分的藥物制劑在臨床上用來(lái)治療心肌缺血。然而,到目前為止,我們還不明白益母草堿是否對(duì)心肌細(xì)胞膜上的離子通道有作用。在本次實(shí)驗(yàn)的第一部分中,我們利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)研究了益母草堿對(duì)單個(gè)成年大鼠心肌細(xì)胞跨膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)的影響。這部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,益母草堿能夠可逆性的抑制L-型鈣通道電流

2、(Ica,L),并且抑制作用服從劑量依賴(lài)性(在鉗制電壓為-40mV時(shí),半數(shù)有效抑制濃度IC50值約為18μM)。益母草堿對(duì)于鈉電流(Ina)和鉀電流(Ik)沒(méi)有明顯作用(實(shí)驗(yàn)中使用的最大濃度達(dá)到200μM)。20和100μM益母草堿都能顯著縮短心肌動(dòng)作電位時(shí)程(APD50及APD90)。在第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中,益母草堿對(duì)鈣通道的抑制作用最令我們感興趣,因?yàn)楹芏嘟?jīng)典的具有心肌保護(hù)作用的藥物具有類(lèi)似的藥理功效(如硝苯地平)。因此我們進(jìn)一步研

3、究了益母草堿鈣通道阻斷作用的機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)有兩點(diǎn)可能與此有關(guān):一是益母草堿能夠影響鈣通道的動(dòng)力學(xué)特征,二是益母草堿能影響鈣通道的蛋白表達(dá)。
　　 在對(duì)鈣通道動(dòng)力學(xué)的研究過(guò)程中,我們發(fā)現(xiàn)20和100μM的益母草堿都能使鈣通道的激活和穩(wěn)態(tài)失活曲線向負(fù)電位方向移動(dòng)。除此之外,上述劑量的益母草堿還能延長(zhǎng)鈣通道失活以后的復(fù)活時(shí)間。接著,我們?cè)诘诙糠盅芯恐杏梅肿由飳W(xué)方法觀察了益母草堿對(duì)L-型鈣通道α1c亞基mRNA和蛋白表達(dá)的影響情況。

4、實(shí)驗(yàn)中,我們以原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細(xì)胞為研究對(duì)象,主要依靠RT-PCR及Westernblot技術(shù)檢測(cè)分析相應(yīng)基因的表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:心肌細(xì)胞在不同劑量的益母草堿(5,10,20,50,100和200μM)作用后,其心肌細(xì)胞鈣通道α1c亞基的mRNA表達(dá)量明顯下降,較對(duì)照組相比分別下降了11.9％,28.4％,47.8％,50.8％,47.8％和46.3％。同時(shí),心肌細(xì)胞鈣通道α1c亞基的蛋白表達(dá)量在益母草堿作用后也明顯下降,較對(duì)照組