伊布利特對(duì)家兔左心室肌細(xì)胞鈉離子通道跨壁異質(zhì)性的影響.pdf

1、目的：由于心肌橫斷面上各層心肌細(xì)胞的復(fù)極存在非均一性，在一定條件下，為某些心律失常的發(fā)生提供了有利條件。心室肌中層細(xì)胞(M細(xì)胞)的電生理特性有別于心內(nèi)膜下(Endo)、心外膜下(Epi)心肌細(xì)胞，使心肌各層的電活動(dòng)呈非均一性，特別是對(duì)抗心律失常藥物的反應(yīng)呈現(xiàn)顯著差異。心室肌快鈉電流(I<,Na>)是在心肌細(xì)胞電生理異質(zhì)性方面起著重要作用的離子通道電流。伊布利特(Ibutilide)是一種新近推出的Ⅲ類(lèi)抗心律失常藥物，主要用于快速轉(zhuǎn)復(fù)心房

2、顫動(dòng)/心房撲動(dòng)，近期動(dòng)物試驗(yàn)中已證實(shí)，伊布利特對(duì)抑制室性心律失常也有作用。本課題利用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，旨在研究伊布利特對(duì)左室三層心室肌細(xì)胞的I<,Na>異質(zhì)性的影響，從而探討伊布利特抗室性心律失常作用的離子機(jī)制。 材料與方法: 1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：新西蘭純種大耳白兔30只，河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雌雄不拘，體重2.0-2.5Kg。 2 心肌細(xì)胞分離：利用酶解的方法分離出三層心室肌細(xì)胞。 3 伊布利特給藥方

3、法及分組：將配好的伊布利特溶液稀釋成10<'-7>M和10<'-6>M，并將其加入細(xì)胞外液進(jìn)行灌流。依據(jù)灌流外液中有無(wú)伊布利特及伊布利特的濃度，將試驗(yàn)分為三組：正常對(duì)照組、伊布利特(10<'-7>M)組、伊布利特(10<'-6>M)組。 4 電流記錄：應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄方法，記錄三層心室肌細(xì)胞I<,Na>活性的變化，伊布利特對(duì)心室肌細(xì)胞I<,Na>活性的影響，并與正常對(duì)照組心肌細(xì)胞進(jìn)行比較分析。電流記錄的刺，激程序由pulse

4、+pulsefit 8.53軟件控制，通道信號(hào)經(jīng)EPC-9膜片鉗放大器放大，通過(guò)Ag-AgCl電極絲和填充電極內(nèi)液的微電極導(dǎo)入細(xì)胞，產(chǎn)生的電流信號(hào)經(jīng)EPC-9轉(zhuǎn)換，為pulse+pulsefit 8.53軟件采集、分析。 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SPSS 10.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間均數(shù)比較采用方差分析，以P<0.05作為顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 1 對(duì)照組、伊布利特組各層細(xì)

5、胞之間的鈉通道異質(zhì)性的變化1.1 對(duì)照組、伊布利特組各層細(xì)胞I<,Na>峰值電流密度的變化正常對(duì)照組的中層細(xì)胞(M)、心內(nèi)膜細(xì)胞(Endo)和心外膜細(xì)胞(Epi)IM<,Na>峰值電流密度分別為-31.53±3.76pA/pF(n=13 cells)、-15.22±2.67 pA/pF(n=12 cells)和-13.00±3.45pA/pF(n=10 cells)，M細(xì)胞與Epi和Endo之間比較P均小于0.01，而Epi和Endo之

6、間比較無(wú)顯著性差異，P>0.05。伊布利特(10<'-7>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>峰值電流密度分別為-11.32±2.33 pA/pF(n=13 cells)、-9.64±3.42 pA/pF(n=10 ells)、-7.82±2.99 pA/pF(n=10cells)，三者之間比較無(wú)顯著差異，P>0.05。伊布利特(10<'-6>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>峰值電流密度分別為-9.60±2.05pA/p

7、F(n=13 cells)、-6.02±2.58 pA/pF(n=10 cells)、-6.70±1.49 pA/pF(n=10 cells)，三者之間比較無(wú)顯著差異。 1.2 對(duì)照組、伊布利特組各層細(xì)胞I<,Na>失活半數(shù)電壓(V<,0.5>)的變化正常對(duì)照組M、Epi和Endo的I<,Na>失活半數(shù)電壓(V<,0.5>)分別為-102.36±8.74mV(n=11cells)、-97.17±15.53 mV(n=11 cel

8、ls)和-93.07±13.79mV(n=10 cells)，M與Epi和Endo比較有顯著性差異，P<0.05，而Epi和Endo比較無(wú)顯著性差異，P>0.05。伊布利特(10<'-7>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>V<,0.5>分別為-107.23±6.58 mV(n=11cells)，-102.01±7.32 mV(n=1.1cells)，-99.14±7.74 mV(n=11cells)，內(nèi)層與外層比較無(wú)明顯差異，其

9、余均有顯著差異。伊布利特(10<'-6>M)組的M、Endo和Epi的I<,Na>失活半數(shù)電壓(V<,0.5>)分別為-124.56±8.22 mV(n=11cells)，-99.83±7.91.mV(n=11cells)，-108.15±6.92 mV(n=11cells)，內(nèi)層與外層比較無(wú)明顯差異，其余均有顯著差異。 1.3 對(duì)照組、伊布利特組各層細(xì)胞I<,Na>失活后再恢復(fù)的變化伊布利特組與正常對(duì)照組相比較均無(wú)顯著性差異，

10、P>0.05，但伊布利特組各層細(xì)胞的滅活后再恢復(fù)明顯減慢。 2 伊布利特對(duì)各層細(xì)胞鈉通道活性的影響2.1 伊布利特對(duì)各層細(xì)胞I<,Na>I-V曲線的影響三組之間的M細(xì)胞有顯著差異P<0.05；對(duì)照組與伊布利特各組之間的Endo細(xì)胞有顯著差異，P<0.01，伊布利特各組之間無(wú)顯著差異；對(duì)照組與伊布利特各組之間Epi細(xì)胞有顯著差異P<0.05，伊布利特各組之間無(wú)顯著差異。 2.2 伊布利特對(duì)各層細(xì)胞I<,Na>穩(wěn)態(tài)失活曲線的

11、影響伊布利特各組與對(duì)照組之間的M細(xì)胞比較有顯著差別P<0.05，伊布利特兩組之間無(wú)顯著差異；三組之間Endo細(xì)胞有顯著差異P<0.05；對(duì)照組與伊布利特各組之間的Epi細(xì)胞有顯著差異P<0.01，伊布利特兩組之間無(wú)顯著差異。 2．3 伊布利特對(duì)各層細(xì)胞I<,Na>失活后恢復(fù)曲線的影響伊布利特各組與正常對(duì)照組內(nèi)中外層組間比較在45ms、95ms和145ms有顯著差異，P<0.05，伊布利特兩組之間各層比較也有差異P<0.05。

12、 結(jié)論 1 兔左室游離壁三層心肌細(xì)胞的快鈉電流存在電生理異質(zhì)性。I<,Na>異質(zhì)性表現(xiàn)為M細(xì)胞較心內(nèi)膜、心外膜有更大的峰值電流，M細(xì)胞的I<,Na>電壓依賴(lài)穩(wěn)態(tài)失活曲線失活最快，而失活后再恢復(fù)曲線三層細(xì)胞無(wú)顯著差異。 2 本研究通過(guò)觀察伊布利特對(duì)心室肌三層細(xì)胞鈉離子通道的作用，并與正常對(duì)照組進(jìn)行了對(duì)比分析。結(jié)果顯示：應(yīng)用伊布利特后，心室肌三層細(xì)胞鈉離子通道受到抑制，其通道活性呈現(xiàn)均一性，使心肌細(xì)胞動(dòng)作電位0相上升速率