大黃素對豚鼠胃竇平滑肌細胞L-型鈣通道電流的影響.pdf

1、目的:胃腸動力學及其疾病的研究是近年迅速發(fā)展起來的新興科學，尋找引起胃腸運動障礙的原因對消化道動力障礙性疾病的治療具有重要意義。中藥方劑大承氣湯對胃動力的影響及其參與調節(jié)胃動力機制的研究尚少，本文的主要目的即研究其主要有效成分大黃素(Emodin)對豚鼠胃竇平滑肌細胞膜L-型鈣通道電流(Ica)的影響，以探討其調控胃腸動力的機制。
　　 方法:采用傳統(tǒng)全細胞模式的膜片鉗技術，記錄正常豚鼠胃竇平滑肌細胞的L-型鈣電流，用Ba2+做

2、載流子記錄Ba2+電流(IBa)，IBa與Ica電流特性相似，可以用IBa代替Ica進行研究。分別用含Ba2+的PSS(生理鹽溶液)、10μMEmodinPSS的和20μMEmodinPSS的灌流細胞，觀察大黃素對豚鼠胃竇平滑肌細胞IBa電流峰值的影響、對IBa的電流-電壓曲線的影響及對IBa的穩(wěn)態(tài)激活和失活特性的影響，記錄每組均應完整記錄六例以上。
　　 結果:在全細胞膜片鉗記錄模式下，持續(xù)用含Ba2+的細胞外液灌流細胞，將細

3、胞膜電位鉗制在-80mV，給予時程為400ms，從-80mV直接階躍到0mV的單一去極化脈沖刺激，且這個脈沖刺激每隔10s重復一次。實驗中記錄到多條單一Ica待電流穩(wěn)定后在細胞外液中加入不同濃度的Emodin。以加藥前的電流作為對照的結果顯示，不論是加入10μMEmodin還是20μMEmodin，IBa都可以被顯著激活，表現為IBa電流峰值明顯增大，而且這種激活作用呈現時間依賴性。
　　 實驗結果顯示，不同濃度Emodin對I

4、Ba的影響是具有電壓依賴性的。在細胞外液中加入10μMEmodin后，在膜電位-10mV～+30mV的電壓范圍內均可以明顯的激活IBa電流（*P＜0.05，**P＜0.01，n=10）;而對于20μMEmodin，在細胞外液中加入藥物后，在膜電位-20mV～+40mV的電壓范圍內均可以明顯的激活IBa電流(*P＜0.05，**P＜0.01，n=10)。同時，10μMEmodin和20μMEmodin對IBa通道的激活閾值都沒有顯著影響。

5、
　　 將細胞膜電位鉗制在-80mV，采用時程400ms，從-60mV～+60mV，步階電位為10mV的去極化脈沖刺激，即可得到一系列對應于不同膜電位的電流值。使用Boltzmann方程I/Imax=1/{1+exp[(VmVa1/2)/κ]｝對得到的不同膜電位下的電流比值進行曲線擬合，得到給藥前后的穩(wěn)態(tài)激活曲線。其中Va1/2為半數最大激活電壓，κ為斜坡因子。統(tǒng)計分析發(fā)現10μMEmodin加入前后，半數激活電壓Va1/2從-

6、12.91±0.61mV變?yōu)?12.69±0.50mV(n=10，P＞0.05)，斜坡因子κ為6.61±0.53和5.47±0.44(n=10，P＞0.05)。說明10μMEmodin對IBa通道的穩(wěn)態(tài)激活特性沒有顯著的影響。
　　 細胞的鉗制電位為-80mV，先給予細胞時程為4s的去極化條件脈沖刺激，這個條件脈沖刺激從-100mV階躍到+40mV，且每次步階電位為20mV，經過條件脈沖刺激后，IBa通道能夠完全處于失活狀態(tài)。條

7、件脈沖刺激后，給予細胞膜時程為1s，固定去極化至0mV的測試脈沖刺激，可得到一系列IBa通道的失活電流。使用Boltzmann方程I/Imax=1/{1+exp[(Vm-Vi1/2)/k]｝對得到的不同測試電位下的電流與最大電流的比值(I/Imax)進行擬合。其中Vi1/2為半數失活電壓，κ為斜坡因子。對Vi1/2進行統(tǒng)計分析，結果發(fā)現Emodin加入前后，半數失活電壓Vi1/2從-27.86±0.76mV變?yōu)?37.23±0.82mV

8、(n=10，P＜0.05)，斜坡因子κ為10.64±0.65和11.73±0.75(n=10，P＞0.05)。說明10μMEmodin可以使IBa的穩(wěn)態(tài)失活曲線向電壓的負方向移動，即10μMEmodin加快了IBa通道的失活過程。
　　 結論:10μMEmodin和20μMEmodin對豚鼠胃竇平滑肌細胞L型鈣通道具有顯著的激活作用，并且這種激活作用具有電壓依賴性和濃度依賴性，10μMEmodin對IBa通道的穩(wěn)態(tài)激活特性沒有顯