華蟾毒精對心肌胞L型鈣電流，鈣瞬變和收縮力的影響.pdf

1、蟾酥是我國的傳統(tǒng)中藥，為蟾蜍皮膚腺體的干燥分泌物?，F(xiàn)代藥理學研究表明其具有抗腫瘤，強心，鎮(zhèn)痛，抗炎，局麻等多種作用，被廣泛的應用于中國、日本、韓國等亞洲國家。
　　目前蟾酥臨床應用廣泛，常用于復方中成藥制劑中，但是作為有毒中藥，其量效關系、中毒劑量、中毒機制、復方配伍等存在諸多問題，陸續(xù)有關于以高濃度可以引起心律失常，驚厥，昏迷甚至死亡的報道。但有趣的是，很多治療冠心病的藥物含有蟾酥，如國產(chǎn)的蟾麝救心丸、麝香保心丸(Shexian

2、g Baoxin Pill，SBP)、日本的救心丹(Kyushin)等。有很多研究表明SBP和Kyushin在治療冠心病(coronary artery heart disease，CHD)等缺血性心肌病上具有顯著的療效。有研究針對服用了含有蟾酥的SBP和Kyushin志愿者，采用高效液相色譜法分析法(high performanceliquid chromatography，HPLC)分別在志愿者的血漿和尿液中測量到了華蟾毒精和它的代

3、謝產(chǎn)物。由此，我們推測華蟾毒精可能具有心肌保護的藥理作用。
　　已有眾多研究表明，鈣拮抗劑如維拉帕米和β-腎上腺素受體阻斷劑如普萘洛爾分別具有抑制心肌L型鈣通道(LTCC)和心肌收縮力的作用，可有效的保護缺血性心肌損傷。我們在前期的研究中發(fā)現(xiàn)華蟾毒精可抑制L型鈣電流(ICa-L)，由此我們推測華蟾毒精作用于心肌細胞可能是通過阻斷心肌細胞ICa-L，降低細胞內(nèi)的鈣離子濃度，使心肌收縮力降低從而降低了心肌耗氧量，而發(fā)揮心肌保護作用。<

4、br>　　華蟾毒精是蟾酥中的主要有效成分之一，已有研究表明華蟾毒精抑制大鼠海馬神經(jīng)元上的延遲整流鉀通電流從而延長動作電位。但是華蟾毒精對心肌細胞上ICa-L，鈣瞬變和收縮力的研究還未見報道。因此，本課題從電生理的角度我們采用全細胞膜片鉗技術(Patch Clamp)和細胞收縮及離子濃度同步測量系統(tǒng)(IonOptix)系統(tǒng)地研究了華蟾毒精對心肌細胞ICa-L，鈣瞬變和收縮力的影響;以闡明華蟾毒精對心肌鈣信號的影響以及心肌保護作用的細胞學機

5、制，為蟾酥臨床應用提供理論依據(jù)。
　　目的:從電生理的角度通過華蟾毒精對心肌細胞ICa-L,鈣瞬變和收縮力的影響，來闡明其可能的心肌保護作用機制。
　　方法:本課題我們采用Patch Clamp和IonOptix系統(tǒng)地研究了華蟾毒精對心肌細胞ICa-L，鈣瞬變和收縮力的影響。
　　結果:
　　1、ICa-L的鑒定和華蟾毒精對ICa-L抑制作用
　　10-7 M維拉帕米幾乎完全阻斷ICa-L，此結果表明所記錄

6、的電流為ICa-L。10-8M華蟾毒精抑制ICa-L.沖洗后ICa-L可部分恢復20％(allP=NS，n=6)。
　　2、華蟾毒精對ICa-L量效關系的影響
　　結果顯示，10-12，10-11，10-10，10-9及10-8 M濃度的華蟾毒精對ICa-L抑制率分別為14.81±2.04％，18.81±0.74％，27.85±1.35％，38.46±2.08％和47.93±3.58％。結果提示華蟾毒精可濃度依賴性地降低IC

7、a-L的電流峰值。
　　3、華蟾毒精對ICa-L的電流-電壓(I-V)曲線的影響
　　華蟾毒精對ICa-L的電流-電壓關系曲線（current-voltage curve，I-V曲線）的影響，在濃度為10-10和10-8M時，給藥后在0mv測量標準化電流從1減小到-0.72±0.02和-0.53±0.04，使電流-電壓曲線上升
　　4、華蟾毒精對缺血性心肌細胞的影響
　　我們測量華蟾毒精在濃度10-10，10-8

8、M電流峰值分別下降到29.99±2.78％和51.57±3.12％(all P=NS,n=5)。
　　5、華蟾毒精對ICa-L穩(wěn)態(tài)激活曲線和失活曲線的影響
　　華蟾毒精在濃度為10-10和10-8M時對ICa-L激活動力學影響:使激活曲線向左移，V1/2從（-46.90±1.21）mV左移至（-52.02±0.80）mV和（-53.44±0.60）mV，斜率因子從7.95±1.07減小至6.77±0.71和6.78±0.55

9、。華蟾毒精在濃度為10-10和10-8M時對ICa-L失活動力學影響:使失活曲線向左移，V1/2從（-26.5±0.61）mV左移至（-29.02±0.50）mV和(-30.70±0.10)mV，斜率因子從3.98±0.45至3.82±0.54和4.60±0.07。
　　6、華蟾毒精對正常大鼠心肌細胞收縮和鈣瞬變的影響
　　和對照組相比，華蟾毒精組的心肌收縮和鈣瞬變的峰值降低。結果表明10-8M華蟾毒精可明顯地抑制心肌細胞收

10、縮和鈣瞬變。同時華蟾毒精引起下降的幅度也相似(P＜0.001，n=7-12)。
　　7、華蟾毒精對心肌細胞收縮時間參數(shù)的影響
　　由心肌收縮開始到達收縮峰值的時間(the time to of the peak，Tp)它代表的意義是心肌收縮的速度，另一測定指標是指從心肌細胞舒張開始到達到50％基線所需時間(the time to50％ of the baseline，Tr)其代表的意義是心肌舒張的速度。Fig.8結果顯示，和