肝素前體多糖的分離純化研究.pdf

1、肝素前體多糖是脊椎動(dòng)物在催化合成肝素的過程中產(chǎn)生的前體物質(zhì)，該物質(zhì)經(jīng)過一系列的硫酸化及異構(gòu)化修飾后即可合成肝素。本研究以E.Coli K5發(fā)酵液為原料，對(duì)肝素前體多糖的提取除雜、分離純化、檢測(cè)以及結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)行了研究。研究結(jié)果如下:
　　1.采用有機(jī)溶劑沉淀的方法，經(jīng)過提取得到的肝素前體多糖粗品為淡黃色粉末物質(zhì)，其糖醛酸含量為23.9％;對(duì)提取的粗多糖進(jìn)行了除雜工藝研究，優(yōu)化了雙氧水氧化法脫色和Sevage法除蛋白的工藝條件。經(jīng)綜合

2、考慮雙氧水氧化法脫色的最佳條件為:雙氧水濃度為1.5％，溫度為25℃，時(shí)間為3h，多糖的脫色率為67.35％;Sevage法除蛋白的最佳工藝條件為氯仿:正丁醇(V/V)為4∶1，樣品:試劑（W/W）為1∶1，萃取時(shí)間10min，萃取次數(shù)為3次，在此條件下多糖的除蛋白率為76.59％。
　　2.研究了乙醇沉淀法對(duì)多糖純化效果的影響。結(jié)果表明，當(dāng)heparosan多糖濃度為14％(W/V)、Nacl濃度為3％(W/V)、乙醇濃度為70

3、％(V/V)，重復(fù)沉淀4次時(shí)，純化物中的葡萄糖醛酸含量可達(dá)44.52％(W/W)，多糖的得率為43.50％（W/W）。
　　3.研究了殼聚糖沉淀法對(duì)多糖純化效果的影響。當(dāng)殼聚糖用量為4.0mg時(shí)，得到沉淀的多糖回收率為94％(W/W)。沉淀繼續(xù)純化得到多糖純品，其糖醛酸含量為45.69％，得率為40.36％。
　　4.研究了DEAE Sepharose fast flow離子交換法對(duì)多糖純化效果的影響。經(jīng)過該法純化的多糖其糖

4、醛酸含量為49.35％，得率為38.52％。
　　5.對(duì)多糖的糖醛酸含量、純度、分子量和理化性質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)和鑒定。硫酸-咔唑法測(cè)糖醛酸含量的最優(yōu)條件是:水解溫度為25℃、硼砂-硫酸用量為4mL、水解時(shí)間為20min、咔唑-乙醇用量為0.15mL、顯色時(shí)間為10min。通過重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)、穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)以及回收率實(shí)驗(yàn)證明了這一方法的可靠和準(zhǔn)確。采用高壓凝膠滲透色譜法(HPGPC)對(duì)多糖的純度和分子量進(jìn)行了鑒定，結(jié)果表明離子交換法得到的多糖純