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文檔簡介
1、目的:制備分泌抗G250單克隆抗體(mAbG250)的雜交瘤。 方法: 1.根據(jù)G250蛋白的氨基酸序列設計并合成多肽。 2.將多肽與牛血清白蛋白(BSA)相耦聯(lián)，Dot-Blot法檢測耦聯(lián)物。 3.耦聯(lián)物作為抗原免疫BALB／c小鼠3次，每次免疫間隔2周。 4.培養(yǎng)小鼠骨髓瘤SP2／0細胞。 5.配制HAT培養(yǎng)基及制備飼養(yǎng)層細胞。 6.取小鼠脾細胞與SP2／0細胞進行融合。
2、 7.檢測克隆陽性孔培養(yǎng)上清，篩選出抗體陽性孔。 8.以有限稀釋法對抗體陽性孔細胞行單克隆化，Dot-Blot法檢測培養(yǎng)上清，待陽性率達到100％后即可建株。 9.擴大培養(yǎng)雜交瘤細胞并凍存。 10.三個月后復蘇雜交瘤細胞，DOt-Blot法檢測培養(yǎng)上清。 11.培養(yǎng)人腎癌Ketr-3細胞株。 12 Western-Blot法檢測培養(yǎng)上清。 結(jié)果: 1.成功制備出多肽與BSA的耦聯(lián)
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