喹烯酮殘留標示物的ELISA檢測方法研究及半抗原設計與合成.pdf

1、本論文通過抗原和抗體的制備及半抗原的改造，進行了在動物可食用組織中喹烯酮殘留的ELISA快速檢測的方法學研究。 首先以鄰硝基苯胺為起始原料，經(jīng)四步反應獲得了高純度的殘留標示物3-甲基-喹噁啉-2-羧酸(MQCA)。并利用其分子結構中已有的羧基為偶聯(lián)位點，以碳二亞胺法和蛋白進行偶聯(lián)，完成了兩種偶聯(lián)物的制備(MQCA-BSA、MQCA-RSA)，經(jīng)紫外光譜法鑒定偶聯(lián)成功。以兩種偶聯(lián)物為不同免疫原、采用不同的免疫時間間隔免疫新西蘭大白

2、兔，獲得多克隆抗體，抗體效價測定和特異性鑒定的實驗結果表明：兩種免疫原均能產(chǎn)生高效價的抗體，免疫間隔延長有利于效價提高，且以RSA為載體有利于避免針對蛋白載體的抗體產(chǎn)生。但間接競爭性ELISA法對抗體的靈敏度測定結果表明，IC50值較高，不能滿足殘留檢測的要求。 本論文認為導致ELISA檢測靈敏度較低的原因，是殘留標示物和蛋白偶聯(lián)后的特征結構發(fā)生改變，誘導產(chǎn)生的抗體不能夠對游離MQCA很好的識別，因此，設計了能夠最大化保留MQC