赤霉病污染大麥作物中結(jié)合態(tài)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇檢測(cè)體系構(gòu)建研究.pdf

1、赤霉病是大麥小麥以及其他小作物中常見(jiàn)的一種真菌病害，其流行不僅導(dǎo)致作物減產(chǎn)，更會(huì)產(chǎn)生真菌毒素威脅人和動(dòng)物的安全．近年來(lái)研究表明，在大麥和小麥中存在著結(jié)合態(tài)真菌毒素，由于這種形式的毒素，尤其是結(jié)合脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)不能被常規(guī)溶劑提取并檢測(cè)其含量，一旦在人和動(dòng)物體內(nèi)消化釋放出這種毒素，將成為潛在的食品安全威脅．
　　 本研究比較了三種不同粉碎顆粒度對(duì)大麥中DON測(cè)定的影響，其中細(xì)顆粒的測(cè)定結(jié)果高于粗顆粒，不過(guò)并不是所有樣品

2、都能夠做出均勻響應(yīng)；在三種不同提取條件的比較中，5g/40mL的比率，較之其他兩種能夠減少取樣誤差，因而取得較理想的提取效果．同時(shí)比較了三種DON的測(cè)定方法：GC—ECD，GC/MS和EZ—TOX試劑盒，試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)GC的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果比較穩(wěn)定，但日常維護(hù)費(fèi)用較高，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)校正物的依賴性較強(qiáng)，樣品處理以及測(cè)定時(shí)間也較長(zhǎng)；EZ—TOX測(cè)定結(jié)果迅速，在測(cè)定范圍內(nèi)較結(jié)果理想，但是測(cè)定范圍有限，而且每5個(gè)樣品的測(cè)定至少需要3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，因而

3、難免會(huì)影響結(jié)果的穩(wěn)定性。通過(guò)比較木瓜蛋白酶，α—淀粉酶/戊基葡糖苷酶，纖維素酶/木質(zhì)素酶處理之后對(duì)大麥樣品中DON測(cè)定的影響，在大麥樣品中存在結(jié)合態(tài)DON，而其中木瓜蛋白酶的處理效果較好，DON的值增加了16—28％．
　　 采用三氯乙酸(TCA)溶劑水解污染大麥樣品，發(fā)現(xiàn)樣品中結(jié)合態(tài)DON普遍存在．但是限于高溫條件下，TCA水解的樣品測(cè)定圖譜噪音較大，干擾因素較多，直接影響到測(cè)定結(jié)果，因而選用具有相似的水解效果(試驗(yàn)過(guò)程中不需

4、要加堿中和反應(yīng))，測(cè)定圖譜更優(yōu)的’TFA水解處理樣品。采用Doehlert Matrix實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)TFA溶劑水解測(cè)定大麥中總DON的試驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化，通過(guò)PC SAS以及專(zhuān)業(yè)的Design—Expert軟件分析，從不同角度對(duì)構(gòu)建的模型進(jìn)行了驗(yàn)證和確認(rèn)，證明該試驗(yàn)?zāi)Ｐ秃芾硐?，因變量總DON測(cè)定值在模型中得到了最大響應(yīng)，即在優(yōu)化條件為：反應(yīng)時(shí)間54min，溫度133℃，TFA濃度1.25M。經(jīng)過(guò)反復(fù)重復(fù)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，確認(rèn)該方法對(duì)于測(cè)定不同大

5、麥麥芽樣品的可行性．同時(shí)還測(cè)定了優(yōu)化條件下DON的回收率為90—98％，說(shuō)明了該定量方法的準(zhǔn)確性．在該優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下比較了8種不同凈化柱對(duì)測(cè)定大麥中DON的影響，計(jì)算不同凈化柱對(duì)DON的回收率，并比較了每?jī)煞N柱子測(cè)定樣品的圖譜與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的疊加圖，在綜合評(píng)價(jià)上述兩個(gè)指標(biāo)之后，發(fā)現(xiàn)在該實(shí)驗(yàn)條件下，Alumina：C18和Mycosep227是8種柱子中凈化效果最好的．
　　 同時(shí)在TFA優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件下還篩查了污染大麥中的結(jié)合態(tài)D