草魚IRF-2、IRF-3基因的克隆、鑒定及IRF-1的功能分析.pdf

1、干擾素調(diào)節(jié)因子(IRF)在細胞抗病毒先天免疫反應過程中有著重要的調(diào)節(jié)作用。近年來，雖然對魚類干擾素系統(tǒng)研究取得重大進展，但對其具體信號轉導路徑和分子機理仍不甚清楚。本研究成功克隆與鑒定了草魚干擾素調(diào)節(jié)因子2(CiIRF-2)和調(diào)節(jié)因子3(CiIRF-3)，并著重對實驗室前期克隆的IRF-1的功能進行了分析。結果顯示:CiIRF-2全長cDNA為1809 bp，其中包括35bp的5'非翻譯區(qū)(5'-UTR)、793bp的3'非翻譯區(qū)(3'

2、-UTR)和1個編碼326個氨基酸的981bp的最大開放閱讀框（ORF）。這個推測的CiIRF-2多肽序列中存在1個含有6個保守色氨酸(W)殘基的保守DNA結合結構域(DBD)。多重比對分析表明，CiIRF-2與多種硬骨魚類及其他高等哺乳動物的IRF-2具有較高的同源性，且與斑馬魚的關系最為密切。CiIRF-3的全長cDNA包含1831 bp，其中含1個262 bp的3'-UTR、1個192bp的5'-UTR及1個1377bp的最大OR

3、F。這個ORF編碼458的氨基酸的蛋白質，其N-端包含一個含有5個保守色氨酸的DBD結構域，而其C-端則包含1個較保守的IRF協(xié)助結構域（IAD）。多重比對分析表明，CiIRF-3與其他比對的其他高等脊椎動物的IRF-3具有較高的同源性。除腦組織外，CiIRF-3在各檢測組織中的本底表達水平均較低，經(jīng)Poly I:C刺激后，各檢測組織中CiIRF-3的轉錄表達水平迅速上升，在肝臟組織和脾臟組織中變化量最為明顯。凝膠阻滯實驗表明原核表達純

4、化的CiIRF-3與草魚IFN啟動子片段有較強的親和性。該結果表明CiIRF-3可能與草魚IFN的轉錄有著潛在的密切關系。
　　 RT-PCR表明在所檢測的組織中CiIRF-1均有較低的本底表達，如果受到PolyI:C或重組草魚干擾素(rCiIFN)刺激后，CiIRF-1的表達量將迅速上調(diào)。體外凝膠阻滯實驗表明，重組CiIRF1與草魚IFN及IRF1的啟動子片段均有不同程度的結合。重組質粒pcDNA3.1-CiIRF-1與pGL