神經(jīng)生長因子活化PC-12細胞鈉離子電流及IRF-1的調控作用.pdf

1、目的：呼吸道合胞病毒(RSV)感染的肺內神經(jīng)生長因子(NGF)的表達顯著增強,增加的NGF水平是否參與呼吸道合胞病毒感染后氣道神經(jīng)可塑性改變過程,目前還未完全明了。本實驗通過神經(jīng)生長因子調節(jié)類感覺神經(jīng)元細胞株大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(PC-12細胞)中Na+離子電流變化水平,以及干擾素調節(jié)因子-1(IRF-1)的調控作用來闡明RSV感染后氣道神經(jīng)可塑性的機制。
　　 方法：⑴用不同濃度的NGF(0ng/ml、50ng/ml及20

2、0ng/ml)刺激PC-12細胞,用全細胞膜片鉗技術檢測不同濃度的NGF的刺激后的Na+電流密度(INa+)。⑵用不同濃度的神經(jīng)生長因子(NGF0ng/ml～200ng/ml)刺激PC-12細胞不同的時間,采用實施聚合酶鏈反應技術(Real-time PCR)檢測PC-12細胞中IRF-1mRNA表達變化。⑶將NGF及IFN-γ刺激的PC-12細胞分為四組,為NGF組、NGF+IFN-γ組、IFN-γ組及空白組,刺激2小時后,用蛋白質印

3、跡技術(Western-bloting)來檢測不同組中PC-12細胞核蛋白中IRF-1的活化程度。⑷將干擾PC-12細胞分為三組,分別為空白組、陰性對照組及實驗組,用200ng/ml NGF分別刺激干擾后的PC12細胞2小時,然后再用全細胞膜片鉗技術檢測感染后的不同組中Na+電流密度和電流密度-電壓曲線。
　　 結果：①不同濃度的NGF刺激PC-12細胞后所檢測的Na+電流密度與不同濃度的NGF有濃度.電流密度依賴關系。②用不同

4、濃度的NGF刺激PC12細胞,當NGF刺激的時間為2 h的時候,PC-12細胞中IRF-1mRNA表達最高。③用Western-bloting檢測不同組PC-12細胞中的IRF-1的表達時,NGF、NGF+IFN-γ、IFN-γ分別與空白組相比較,均有體統(tǒng)計學意義。④在IRF-1被干擾后,用全細胞膜片鉗技術檢測各組中PC-12細胞中Na+電流密度,空白組為(31.26±1.72 n=5)pA/pF,陰性對照組為(34.81±0.64 n

5、=5)pA/pF,實驗組為(12.92±0.55 n=5)pA/Pf。在陰性對照組與空白組中的比較中,Na+電流密度無統(tǒng)計學意義。而與空白組及陰性對照組比較,實驗組中的Na+電流密度明顯受到抑制,有統(tǒng)計學意義。而I Na+I-V曲線,與實驗組相比較,空白組及陰性對照組I-V曲線下移,但INa+電壓依賴不變,對激活電位、峰值電位、及I-V曲線的形態(tài)軌跡無影響。
　　 結論：⑴NGF可以活化PC12細胞中Na+離子電流。⑵IRF-1