IRF-1調(diào)控IFP35表達(dá)及抑制BFV復(fù)制作用機(jī)制初探.pdf

1、干擾素調(diào)節(jié)因子(IRFs)和核因子κB(NF-κB)是細(xì)胞中兩類重要的轉(zhuǎn)錄因子，對(duì)于細(xì)胞的先天免疫應(yīng)答至關(guān)重要。目前在人的細(xì)胞中共發(fā)現(xiàn)了9個(gè)IRFs，即IRF-1到IRF-9。其中，IRF-1是首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的IRFs家族成員，其靶蛋白參與了細(xì)胞內(nèi)多種生物學(xué)功能的調(diào)控，包括抗病毒、抗增殖及細(xì)胞凋亡等。NF-κB能夠調(diào)控干擾素-β、炎癥因子以及白介素等基因的表達(dá)，在細(xì)胞的免疫應(yīng)答及炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的作用。
　　泡沫病毒(FVs)是一

2、類特殊的反轉(zhuǎn)錄病毒，與其他反轉(zhuǎn)錄病毒相比，F(xiàn)Vs的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制及生活周期具有諸多獨(dú)特之處。FVs在體外培養(yǎng)的細(xì)胞中能夠引起強(qiáng)烈的細(xì)胞病變，在其天然宿主中卻處于潛伏感染狀態(tài)，并不引發(fā)任何癥狀。目前關(guān)于FVs處于潛伏感染狀態(tài)的具體機(jī)制尚不清楚。本室前期研究發(fā)現(xiàn)牛泡沫病毒(BFV)通過(guò)激活HeLa細(xì)胞的NF-κB通路上調(diào)了RelB的表達(dá)，RelB作為BFV反式激活因子BTas的輔因子增強(qiáng)了BTas介導(dǎo)的對(duì)LTR的反式激活作用，進(jìn)而促進(jìn)了BFV

3、的復(fù)制。然而，NF-κB的激活并不能使BFV由潛伏感染狀態(tài)向裂解感染狀態(tài)轉(zhuǎn)換，推測(cè)BFV有可能通過(guò)NF-κB激活了其他抗病毒因子。此外，本室前期研究發(fā)現(xiàn)，干擾素誘導(dǎo)蛋白IFP35可以抑制BFV的復(fù)制，但BFV感染對(duì)IFP35表達(dá)的影響尚不清楚。本文即對(duì)BFV與宿主的相互作用展開(kāi)了進(jìn)一步的研究，以期了解BFV活化NF-κB后是否會(huì)激活I(lǐng)FP35或其他抗病毒因子的表達(dá)，從而為揭示BFV處于潛伏感染狀態(tài)的機(jī)制提供線索。
　　為了便于研究

4、BFV感染對(duì)IFP35表達(dá)的影響，我們對(duì)IFP35的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制進(jìn)行了較為詳細(xì)的分析，發(fā)現(xiàn)IFP35可以被IRF-1、IRF-2及組成活化型的IRF-3及IRF-7誘導(dǎo)表達(dá)。其中IRF-1可以直接結(jié)合在IFP35啟動(dòng)子的干擾素刺激應(yīng)答元件(ISRE)上，參與了IFP35的組成型表達(dá)，并介導(dǎo)了Ⅰ型干擾素和Ⅱ型干擾素對(duì)IFP35的誘導(dǎo)。此外，我們發(fā)現(xiàn)雖然IFP35的啟動(dòng)子區(qū)域沒(méi)有NF-κB結(jié)合位點(diǎn)，但是NF-κB通路上游的激酶NIK可以通過(guò)

5、激活I(lǐng)RF-1，進(jìn)而通過(guò)上述機(jī)制上調(diào)IFP35的表達(dá)水平。
　　鑒于IRF-1在IFP35轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的重要性，我們研究了BFV感染對(duì)IRF-1表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)在HeLa細(xì)胞中BFV的反式激活因子BTas可以通過(guò)NF-κB通路上調(diào)IRF-1的表達(dá)水平。隨后，對(duì)IRF-1對(duì)BFV復(fù)制的影響進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在HeLa和293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)IRF-1均可以強(qiáng)烈地抑制BFV的復(fù)制，且其抑制BFV復(fù)制的能力遠(yuǎn)強(qiáng)于IFP35。此外，與IFP35類

6、似，在293T細(xì)胞中過(guò)表達(dá)IRF-1也可以抑制BTas介導(dǎo)的對(duì)LTR的反式激活作用，但是不同于IFP35，IRF-1還可以抑制BTas介導(dǎo)的對(duì)內(nèi)部啟動(dòng)子IP的反式激活作用，表明IRF-1抑制BFV復(fù)制的作用并不完全通過(guò)誘導(dǎo)IFP35的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)。鑒于IRF-1是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)控諸多干擾素誘導(dǎo)基因(ISGs)的表達(dá)，這些ISGs共同作用抑制了BFV的復(fù)制。因此，我們初步檢測(cè)了IFITM1、IFITM3、IFIT3、ISG15和

7、MxA等IRF-1的靶蛋白對(duì)BFV復(fù)制的影響，結(jié)果顯示上述ISGs對(duì)BFV的抑制作用并不十分顯著，不是IRF-1抑制BFV復(fù)制過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用的ISGs。
　　綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)BFV感染后，病毒在活化NF-κB通路促進(jìn)自身基因表達(dá)的同時(shí)，觸發(fā)了細(xì)胞的天然免疫防御機(jī)制，細(xì)胞通過(guò)上調(diào)IRF-1的表達(dá)，強(qiáng)烈地抑制BFV的復(fù)制;IFP35是IRF-1行使抑制作用的效應(yīng)基因之一;IRF-1是BFV在HeLa細(xì)胞中處于潛伏感染狀態(tài)的重要