Ki-67和IRF-1預(yù)測HCC肝移植預(yù)后的臨床及機制研究.pdf

1、一、肝切除術(shù)后HCC復發(fā)患者行肝移植的預(yù)后分析
　　目的：通過初發(fā)HCC肝移植和HCC復發(fā)后肝移植的移植物生存比較，明確肝切除術(shù)后HCC復發(fā)患者行肝移植對肝移植預(yù)后的影響。
　　方法：對2000年1月1日至2011年12月31日間于天津市第一中心醫(yī)院行肝移植的患者病史資料和生存資料進行回顧分析。最終1554名患者納入研究。根據(jù)移植前HCC情況分組，包括初發(fā)HCC組1392例，復發(fā)HCC（因HCC復發(fā)行肝移植）組162例。

2、r>　　結(jié)果：全部病例的分析中，初發(fā)HCC組與復發(fā)HCC組的移植物生存曲線存在顯著的統(tǒng)計學差異（P=0.030）；Cox回歸分析顯示：初發(fā)/復發(fā)HCC（P=0.049）、MELD評分（P<0.001）、Milan標準分組（P=0.022）和UCSF標準分組（P<0.001）對移植物生存存在獨立影響。亞組分析中，Cox回歸分析顯示：Milan-UCSF標準分級是復發(fā)HCC的唯一獨立危險因素（P=0.023）。符合Milan標準的肝癌患者中

3、，初發(fā)HCC（768例），復發(fā)HCC（61例）移植物生存曲線無統(tǒng)計學差異（P=0.292）。超出Milan標準但符合UCSF標準的肝癌患者中，初發(fā)HCC（304例）和復發(fā)HCC（63例）組的移植物生存曲線存在統(tǒng)計學差異（P=0.046）。
　　結(jié)論：HCC復發(fā)后的肝移植對術(shù)后移植物生存存在獨立影響；HCC復發(fā)后肝移植的移植物生存與術(shù)前肝內(nèi)復發(fā)病灶的分期有關(guān)。
　　二、肝移植術(shù)后HCC復發(fā)與腫瘤生長速度的關(guān)系
　　目的：

4、通過肝移植后HCC復發(fā)時間（TTR）和肺轉(zhuǎn)移病灶生長速度的相關(guān)分析，明確腫瘤生長速度與肝移植術(shù)后HCC復發(fā)的關(guān)系
　　方法：在天津市第一中心醫(yī)院電子病歷系統(tǒng)中，選取2010年1月1日至2013年9月31日間進行肝移植手術(shù)且存在肝移植術(shù)后肺轉(zhuǎn)移癌的病例。共檢索到符合入組條件的肝移植術(shù)后肺轉(zhuǎn)移病例32例。在病理組織庫中，獲得了其中26例的肝癌標本（移植術(shù)中切除標本），進行Ki-67免疫組化染色。
　　結(jié)果：通過相關(guān)分析描述肝癌肺

5、轉(zhuǎn)移患者的TTR與肺轉(zhuǎn)移癌中靶病灶直徑增加速度的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)兩者顯著相關(guān)（n=32，P=0.021），而肝癌肺轉(zhuǎn)移患者的TTR與Ki-67表達也存在顯著相關(guān)（n=26，P=0.045）。
　　結(jié)論：HCC生長速度與肝移植術(shù)后HCC復發(fā)相關(guān)。
　　三、Ki-67和IRF-1對肝移植術(shù)后HCC復發(fā)的預(yù)測作用
　　目的：評價分子標記物對肝移植術(shù)后HCC復發(fā)的預(yù)測價值。
　　方法：納入2012年1月1日至2014年12月3

6、1日于天津市第一中心醫(yī)院進行肝移植手術(shù)的全部符合入選標準的肝移植病例，通過免疫組化染色研究了肝癌組織中多種分子標記物表達。通過每種分子標記物的表達情況對入選病例分別進行分組，比較組間無瘤生存率的變化，判定每種分子標記物對肝移植術(shù)后無瘤生存的影響。
　　結(jié)果：最終納入127例HCC病例，通過免疫組化分組和無瘤生存比較（結(jié)果通過Benjamini-Hochberg法校正），Milan-UCSF標準劃分的各分組間（q<0.001）、有/

7、無間質(zhì)脈管癌栓組間（q<0.001）、Ki-67陰性/陽性組間（q<0.001）和 Ki-67低表達/高表達組間（q=0.001）的累積無瘤生存存在統(tǒng)計學差異。Cox回歸分析結(jié)果顯示：Milan/UCSF分期（P<0.001）、間質(zhì)脈管癌栓（P<0.001）和Ki-67（P<0.001）是肝移植術(shù)后無瘤生存的獨立危險因素。在超出Milan標準的亞組中，IRF-1陰性與陽性患者的肝移植術(shù)后無瘤生存也存在顯著差異（q<0.001）。在符合U

8、CSF標準的HCC患者中，初發(fā)HCC組與復發(fā)HCC組的Ki-67陽性比例存在顯著差異（P=0.022）。
　　結(jié)論：Ki-67可有效的預(yù)測的肝移植術(shù)后 HCC的復發(fā)，可用于肝移植術(shù)前HCC患者的評估；在符合UCSF標準的HCC患者中，初發(fā)和復發(fā)HCC的Ki-67表達存在差異，可能是導致兩者移植物預(yù)后差異的原因之一；IRF-1不適合作為肝移植術(shù)后HCC復發(fā)的預(yù)測指標。但在超出Milan標準的HCC中，IRF-1表達伴隨更低的肝移植術(shù)

9、后HCC復發(fā)。
　　四、IRF-1對HCC細胞凋亡和自噬的影響
　　目的：通過人肝癌細胞系SK-Hep1的體外研究，探索IRF-1對人HCC細胞凋亡和自噬的影響。
　　方法：實驗一中，通過MTT檢測IFN-γ對SK-Hep1細胞活性的影響。實驗二和三中，將SK-Hep1細胞分為：空白對照組，IFN-γ組。通過Western Blot方法測定自噬和凋亡相關(guān)蛋白變化。通過DAPI/PI染色熒光顯微鏡觀察和Annexin V

10、-FITC/PI染色流式細胞分析，確定IFN-γ刺激后細胞凋亡的情況。觀察熒光雙標LC3轉(zhuǎn)染的SK-Hep1細胞IFN-γ刺激后LC3熒光斑變化。觀察SK-Hep1細胞IFN-γ刺激后電鏡下超微結(jié)構(gòu)改變。實驗四中，將SK-Hep1細胞分為：空白對照組，IFN-γ組，Z-VAD-FMK組，Z-VAD-FMK＋IFN-γ組。通過Western Blot方法測定自噬相關(guān)蛋白變化。實驗五中，將 SK-Hep1細胞分為：空白對照組，陰性對照組，(

11、IRF-1) siRNA1組，siRNA2組，siRNA3組，siRNANC＋IFN-γ組， siRNA1＋IFN-γ組。通過Western Blot方法測定自噬相關(guān)蛋白變化。
　　結(jié)果：SK-Hep1細胞受到IFN-γ刺激后IRF-1、pSTAT1增加，Ki-67降低， LC3-II減少，Caspase-3裂解增加。PI和流式細胞分析顯示，IFN-γ刺激后死亡細胞比例增加。在轉(zhuǎn)染了熒光雙標LC3的SK-Hep1細胞中，IFN-γ

12、較組對照組LC3熒光聚集減少。透射電鏡下 IFN-γ刺激的 SK-Hep1細胞中自噬體減少。Caspase抑制劑聯(lián)合IFN-γ處理的SK-Hep1細胞與單獨Caspase抑制劑處理時相比，Beclin1、LC3-II、Atg5和Atg7的蛋白量無明顯下降。SK-Hep1細胞接受IRF-1 siRNA處理后，LC3-II水平和LC3-II/LC3-I比例明顯下降。IRF-1 siRNA＋IFN-γ組與siRNANC＋IFN-γ組相比，LC