雞TBK1基因的克隆、表達(dá)及其對(duì)IRF3信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響.pdf

1、TBK1（別名T2K，NAK）是非經(jīng)典IκB激酶家族成員之一，具有諸多生物學(xué)功能，其中包括參與炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和先天免疫等，也是治療諸多疾?。ㄉ窠?jīng)性炎癥、自身免疫疾病、腫瘤性疾?。┮约翱刂撇《拘愿腥镜臐撛谒幬镏委煱悬c(diǎn)。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，TBK1是先天免疫模式識(shí)別受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的核心蛋白，在調(diào)控先天抗病原微生物免疫上具有重要的作用，但關(guān)于該基因是否在雞先天免疫中發(fā)揮作用，怎樣作用還未有報(bào)道。為此，本試驗(yàn)以雞TBK1為目標(biāo)基因，利用分

2、子克隆技術(shù)對(duì)雞TBK1基因進(jìn)行了克隆;通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了雞TBK1基因在雞不同組織中的表達(dá);選用SPF雞進(jìn)行了機(jī)體ALV-J攻毒試驗(yàn)，檢測(cè)機(jī)體在抵御病毒過(guò)程中雞TBK1的表達(dá)量變化;以雞胚成纖維細(xì)胞為細(xì)胞模型，進(jìn)行細(xì)胞ALV-J刺激和polyI:C轉(zhuǎn)染試驗(yàn)，檢測(cè)了細(xì)胞在病毒入侵過(guò)程中雞TBK1的表達(dá)量變化。獲得以下主要結(jié)果:
　　(1)雞TBK1基因的CDS區(qū)全長(zhǎng)為2190bp，編碼729個(gè)氨基酸;雞TBK1基因與其他鳥類

3、和哺乳類的同源性均較高，在85％以上，在進(jìn)化上相對(duì)保守;雞TBK1具有兩個(gè)保守結(jié)構(gòu)域（激酶結(jié)構(gòu)域和泛素樣結(jié)構(gòu)域），位于該蛋白的氮端，且激酶結(jié)構(gòu)域具有兩個(gè)重要的位點(diǎn)，ATP結(jié)合位點(diǎn)和第172為的絲氨酸位點(diǎn)。
　　(2)雞TBK1基因在組織中廣泛表達(dá)，且在免疫組織（脾、胸腺、法氏囊）中的表達(dá)量顯著高于其他組織(P＜0.01)。
　　(3)與對(duì)照組相比，SPF雞機(jī)體ALV-J攻毒組雞TBK1基因的mRNA表達(dá)量在脾臟、胸腺、法氏囊

4、中顯著上升（P＜0.05或P＜0.01）;ALV-J和polyI:C刺激的雞胚成纖維細(xì)胞組雞TBK1基因的mRNA表達(dá)量也顯著上升(P＜0.01);以上結(jié)果說(shuō)明TBK1參與雞機(jī)體以及雞細(xì)胞的抗病毒反應(yīng)。
　　(4) ALV-J和polyI:C刺激的雞胚成纖維細(xì)胞中，IRF3、IFNβ和IFNα的表達(dá)量的顯著上升(P＜0.01);與陰性對(duì)照(NC)相比，雞TBK1基因干擾細(xì)胞組的IRF3、IFNβ和IFNα的表達(dá)量受到了顯著的影響（