回藥愛康方對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞和人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞bcl-2以及p53表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　通過中藥血清藥理學(xué)方法，探討回藥愛康方對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞和人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞的生長增殖、周期的影響以及對(duì)Bcl-2蛋白、突變型p53（mtp53）表達(dá)水平的影響。
　　方法：
　　將80只雄性SD大鼠隨機(jī)分為8組，每組10只，分別為：對(duì)照組（NS），回藥愛康方低、中、高劑量（AKRL、AKRM、AKRH）組，環(huán)磷酰胺（CTX）組，回藥愛康方低、中、高劑量聯(lián)合環(huán)磷酰胺（AKRL/AKRM/AK

2、RH+CTX）組。分別給予相應(yīng)回藥愛康方低、中、高劑量濃縮水煎劑灌胃，連續(xù)5天；CTX組和聯(lián)合組再按20mg/kg給予環(huán)磷酰胺于第1、3、5天腹腔注射，NS組給予等量生理鹽水，制備含藥血清。體外培養(yǎng)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞和人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，應(yīng)用MTT法檢測各組含藥血清對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞和人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期時(shí)相分

3、析，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測細(xì)胞bcl-2以及p53蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.細(xì)胞形態(tài)的改變在倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞的形態(tài)，正常的Lewis細(xì)胞和SK-MES-1細(xì)胞貼壁生長良好，細(xì)胞邊界清楚，胞漿勻?qū)??；厮帎劭捣胶幯甯深A(yù)各組細(xì)胞后，Lewis細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞皺縮、體積變小以及脫落現(xiàn)象；SK-MES-1細(xì)胞也不同程度的出現(xiàn)細(xì)胞膜回縮、胞核的空泡樣改變、細(xì)胞膜的破裂及細(xì)胞的壞死脫落。隨著血清濃度的增加，干預(yù)時(shí)間的延長，和A

4、KR組、CTX組相比較，AKR聯(lián)合組的細(xì)胞形態(tài)變化更加明顯?；厮帎劭捣胶幯鍧舛冗_(dá)到20％且干預(yù)細(xì)胞72h后，AKRH+CTX組細(xì)胞數(shù)量明顯減少，細(xì)胞形態(tài)的改變尤為明顯。
　　2.細(xì)胞增殖的影響和NS組比較，回藥愛康方含藥血清作用不同時(shí)間對(duì)Lewis細(xì)胞和SK-MES-1細(xì)胞生長增殖有抑制作用（p<0.05），回藥愛康方高劑量聯(lián)合CTX組的抑制率明顯高于其他組，抑制程度呈時(shí)間和濃度依賴性。20%濃度的回藥愛康方含藥血清干預(yù)Lew

5、is細(xì)胞和SK-MES-1細(xì)胞72h后AKRH+CTX組的抑制率分別達(dá)到了64.1%和42.3%。
　　3.細(xì)胞周期的影響5%、10%和20%濃度的含藥血清作用于Lewis細(xì)胞和SK-MES-1細(xì)胞24h、48h、72h后，和NS組相比，各實(shí)驗(yàn)組G0/G1期細(xì)胞比例逐漸增多，而S期細(xì)胞比例逐漸減少（p<0.05）。20%濃度含藥血清干預(yù)細(xì)胞72h后，各實(shí)驗(yàn)組G0/G1期細(xì)胞比例多于5%、10%濃度含藥血清組，S期細(xì)胞比例則較之減少

6、，AKRH+CTX組表現(xiàn)最為明顯。
　　4.Bcl-2以及p53蛋白表達(dá)的影響在不同濃度的含藥血清作用下，和NS組相比，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的IOD值逐漸減小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；20%濃度的含藥血清各實(shí)驗(yàn)組IOD值低于5%、10%濃度的含藥血清組（p<0.05）。分別干預(yù)細(xì)胞24h、48h、72h后，與NS組比較，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的IOD值逐漸減?。╬<0.05）；20%濃度含藥血清干預(yù)細(xì)胞72h，各實(shí)驗(yàn)組的陽性表達(dá)逐漸減弱，

7、IOD值較低（p<0.05），AKRH+CTX組細(xì)胞的抑制率最高，故陽性表達(dá)最弱，IOD值最低。
　　結(jié)論：
　　1.回藥愛康方能夠抑制小鼠Lewis肺癌細(xì)胞和人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞的生長增殖，同時(shí)與CTX有協(xié)同作用；
　　2.回藥愛康方聯(lián)合CTX能增強(qiáng)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖周期的抑制，影響細(xì)胞DNA合成、復(fù)制，使細(xì)胞阻滯在G0/G1期，同時(shí)減少細(xì)胞進(jìn)入S期，從而起到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。
　　3.回藥愛康方可以