復(fù)方解毒化瘀方對(duì)P388-VCR細(xì)胞Bcl-2表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的:
　　本研究擬建立P388/VCR細(xì)胞白血病多藥耐藥模型，予小、中、大劑量的復(fù)方解毒化瘀方聯(lián)合長(zhǎng)春新堿(VCR)逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(Bcl-2)的表達(dá)，探討復(fù)方解毒化瘀方逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥可能的分子機(jī)制。
　　方法:
　　(1)細(xì)胞的培養(yǎng):將P388/VCR細(xì)胞在37℃、5％CO2條件的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，按常規(guī)細(xì)胞傳代方法進(jìn)行傳代。
　　(2)實(shí)驗(yàn)分組:所購(gòu)裸鼠隨機(jī)分成

2、:ZC:正常對(duì)照組、MX:模型組、VZ:長(zhǎng)春新堿組、XJ:小劑量復(fù)方解毒化瘀方+VCR組、ZJ:中劑量復(fù)方解毒化瘀方+VCR組、DJ:大劑量復(fù)方解毒化瘀方+VCR組。
　　(3)造模及用藥:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的P388/VCR細(xì)胞，含2×106個(gè)、量為0.2ml/只于裸鼠腹腔接種。造模后開(kāi)始觀察觀察各組裸鼠精神、覓食、皮膚色澤、活動(dòng)度，體重、腹水情況;取腹水、外周血及骨髓涂片，吉姆薩染色，油鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，計(jì)算白血病細(xì)胞數(shù)及所占百分比

3、，判斷造模是否成功;分別給裸鼠蒸餾水、生理鹽水灌胃，VCR腹腔注射，小、中、大劑量復(fù)方解毒化瘀方灌胃及VCR，長(zhǎng)春新堿:（1次/2d X5次），復(fù)方解毒化瘀方:（1次/d×10次）;造模開(kāi)始后查外周血(1次/2d)，測(cè)量瘤塊及觀察裸鼠一般情況。
　　(4)用MTT法分別檢測(cè)P388/VCR細(xì)胞株體內(nèi)外的耐藥倍數(shù)。
　　(5)觀察用藥前、后裸鼠的精神、覓食、皮膚色澤、活動(dòng)度，體重、腹水，測(cè)量裸鼠瘤塊體積情況，抽取腹水、外周血，

4、骨髓涂片，觀察腹水、外周血及骨髓原始+早幼粒細(xì)胞百分比。
　　(6)各組用藥結(jié)束后，次日眼球取血，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組Bcl-2表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)裸鼠接種后，腹水形成時(shí)間:4.50±0.50天，瘤塊形成時(shí)間:5.63±0.77天，成瘤率83％，接種前各組體重隨時(shí)間延長(zhǎng)，體重明顯增加，接種后隨著裸鼠腹水、瘤塊形成時(shí)繼續(xù)增加，隨實(shí)驗(yàn)進(jìn)程裸鼠精神、飲食變差，抽取腹水，多次外周取血，裸鼠體重開(kāi)始下降，在用藥后體重緩

5、慢下降。
　　(2)MTT法測(cè)得P388/VCR細(xì)胞株并計(jì)數(shù)出:體外耐藥倍數(shù)5.68倍，接種體內(nèi)后其耐藥倍數(shù)為4.6倍，其耐藥性仍保持。
　　(3)接種后裸鼠腹水、瘤塊形成時(shí)，抽取腹水、外周血及骨髓涂片的白血病細(xì)胞計(jì)數(shù)均＞200個(gè)/片。
　　(4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)裸鼠外周血細(xì)胞Bcl-2表達(dá)，ZC Bcl-2的表達(dá)甚少，MX的Bcl-2表達(dá)最高，VZ與XJ的Bcl-2表達(dá)均不同程度下降，XJ與ZJ、DJ相比有顯著差異(P

6、＜0.01)，ZJ較XJ的Bcl-2表達(dá)下降，DJ與ZJ相比具有差異(P＜0.05)，DJ的Bcl-2表達(dá)進(jìn)一步下降，說(shuō)明與一定濃度的復(fù)方解毒化瘀方藥液作用呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:
　?、貾388/VCR細(xì)胞株接種于裸鼠體內(nèi)，其耐藥性仍保持;
　?、趶?fù)方解毒化瘀方逆轉(zhuǎn)白血病耐藥細(xì)胞株P(guān)388/VCR的機(jī)制之一可能與下調(diào)Bcl-2的超量表達(dá)相關(guān);
　　③復(fù)方解毒化瘀方可降低P388/VCR耐藥細(xì)胞裸鼠模型Bcl-2的