Bcl-2對兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控及LN對其表達(dá)的影響.pdf

1、　　目的：(1) 通過觀察抗兔Bcl-2抗體對兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡情況的影響,探討B(tài)cl-2對角膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的調(diào)控關(guān)聯(lián)性：(2) 研究層粘連蛋白對兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞bcl-2表達(dá)的影響。
　　方法：(1) 倒置顯微鏡觀察體外培養(yǎng)的兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及數(shù)目變化,計(jì)數(shù)每天的細(xì)胞數(shù)目并繪制細(xì)胞生長曲線；分別在基礎(chǔ)培養(yǎng)液和添加抗兔Bcl-2抗體的培養(yǎng)液中培養(yǎng)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞24h,紫外線誘導(dǎo)角膜內(nèi)皮細(xì)胞凋亡,再培養(yǎng)24h,流式細(xì)胞技術(shù)和電鏡技術(shù)

2、檢測并比較兩組細(xì)胞凋亡情況。(2) 利用ELISA方法探索層粘連蛋白對兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞的最適濃度；然后分別在基礎(chǔ)培養(yǎng)液和添加層粘連蛋白的培養(yǎng)液中培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞12h,利用免疫組化技術(shù)和ELISA檢測分析兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞bcl-2表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1) 細(xì)胞生長曲線圖提示細(xì)胞生長符合一般細(xì)胞生長規(guī)律；流式細(xì)胞技術(shù)檢測顯示抗體處理組凋亡細(xì)胞比例顯著高于對照組,提示Bcl-2可以抑制角膜內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡,增強(qiáng)其活性。光鏡下,對照組細(xì)胞分布

3、呈花瓣樣、團(tuán)狀分布,細(xì)胞密度適中,細(xì)胞緊密貼附培養(yǎng)皿底部,細(xì)胞邊界清晰,細(xì)胞核大小一致,清晰可見；與對照組相比,抗體處理組細(xì)胞生長不良,部分細(xì)胞不能與培養(yǎng)皿底部緊密貼附,漂浮于培養(yǎng)液表面,細(xì)胞胞漿內(nèi)空泡多見,胞核形狀大小不一致,邊界稍模糊；透射電鏡發(fā)現(xiàn)抗體處理組有明顯的凋亡表現(xiàn),如染色質(zhì)邊集,核濃縮,出現(xiàn)凋亡小體等。(2) 利用ELISA方法初步顯示層粘連蛋白可以促進(jìn)兔角膜內(nèi)皮細(xì)胞bcl-2表達(dá)并有劑量依賴關(guān)系,最終測得層粘連蛋白對兔角