視網膜母細胞瘤中BAG-1、BCL-2和P53表達的組織芯片檢測.pdf

1、研究背景視網膜母細胞瘤(retinoblastoma，RB)是來源于視網膜細胞的惡性腫瘤，是嬰幼兒時期最常見的眼內惡性腫瘤。若RB治療不及時常會危及患者生命，眼球摘除還會給患者及家屬帶來痛苦，因而早期發(fā)現、早期治療對患者的預后至關重要。視網膜母細胞瘤的發(fā)病機制中得到最多公認的是視網膜母細胞瘤基因失活。而近年來對抗凋亡機制的研究較多，發(fā)現了一些抗凋亡因子在視網膜母細胞瘤中過表達，使人們認識到抗凋亡因子參與了視網膜母細胞瘤的發(fā)病，視網膜母細

2、胞瘤的發(fā)病是多因素的共同結果。Bag-1是目前研究最多的多功能抗凋亡基因，已證實它與bcl-2、p53等多種抗凋亡基因有密切聯系，廣泛存在于乳腺癌、胃癌、子宮頸癌等多種惡性腫瘤之中，但視網膜母細胞瘤之中是否存在bag-1，目前國內外尚未見報道。已有實驗證實BCL-2和P53在視網膜母細胞瘤組織中過表達，但尚無文獻對這三者之間的聯系作探討。 組織芯片是將大量的小組織片整齊地排列在載玻片上而成的微小組織切片，具有高效、快速、低消耗、

3、自身內對照和可比性強的特點。組織芯片技術在多種研究領域已有較為廣泛的運用，但目前尚未見有用于眼科領域的報道。 目的(1)制作和驗證組織芯片用于視網膜母細胞瘤的研究。 (2)通過免疫組織化學的方法觀察視網膜母細胞瘤組織芯片中BAG-1、BCL-2和P53的表達，并探討其與視網膜母細胞瘤的臨床關系，為視網膜母細胞瘤的發(fā)病機制研究和診治提供新的思路。 方法(1)利用16例視網膜母細胞瘤組織、5例正常視網膜組織和1例已知

4、上述三抗體陽性表達的乳腺癌組織做成組織芯片，并與常規(guī)切片表達BAG-1情況進行對比。 (2)采用免疫組織化學超敏S-P法、DAB染色檢測視網膜母細胞瘤和正常視網膜組織中BAG-1、BCL-2和P53的表達。分析其與視網膜母細胞瘤細胞類型和臨床預后的關系。 結果(1)22張標本組織切片和組織芯片相對應的22點染色結果為共同陽性表達15例，共同陰性表達5例，不同表達者2例。其表達一致率達90.90％(20/22，K=0.77

5、1) (2)視網膜母細胞瘤組織芯片中BAG-1、BCL-2和P53均有過表達。其中：①BAG-1經染色后呈棕黃色顆粒狀，主要定位于胞漿，少數位于胞核中，腫瘤組陽性率87.5％(14/16)，正常視網膜組陽性率20％(1/5)，二者之間存在顯著差異(P=0.011，＜0.05)。②BCL-2經染色后呈淡棕黃色顆粒狀，主要定位于胞漿，腫瘤組陽性率93.75％(15/16)，正常視網膜組陽性率40％(2/5)，二者之間存在顯著差異(P

6、=0.028，＜0.05)。③P53經染色后呈棕黃色顆粒狀，主要定位于胞核，腫瘤組表達陽性率為81.25％(13/16)，正常視網膜組無陽性表達(0/5)，二者之間存在顯著差異(P=0.003，＜0.01)。④BAG-1的表達與P53高度一致性(K=0.765)，而BAG-1與BCL-2和P53與BCL-2的表達情況無一致性(K＜0)。 (3)BAG-1的表達強度與視網膜母細胞瘤細胞的分化程度無關(P=0.610，＞0.05)，

7、但其表達陽性與腫瘤的預后負相關(P=0.025，＜0.05)。BCL-2的表達強度與視網膜母細胞瘤細胞的分化程度(P=0.625，＞0.05)和預后(P=0.813，＞0.05)無關。P53的表達強度與視網膜母細胞瘤細胞的分化程度無關(P=0.304，＞0.05)，但與腫瘤的預后負相關(P=0.002，＜0.05)。 結論(1)組織芯片技術用于視網膜母細胞瘤蛋白表達的研究是可靠的。 (2)BAG-1、BCL-2和P53在