酪氨酸激酶抑制劑BIBF1120逆轉(zhuǎn)P-gp介導肝癌HepG2-adr細胞株多藥耐藥的實驗研究.pdf

1、[目的]
　　 多藥耐藥是阻礙肝癌化療效果的主要屏障，其產(chǎn)生的重要原因是腫瘤細胞P-gp高表達。本研究檢測了多靶點酪氨酸激酶抑制劑BIBF1120逆轉(zhuǎn)P-gp介導的多藥耐藥并對其機理進行探討。
　　 [方法]
　　 以人肝癌細胞株HepG2和它的P-gp高表達多藥耐藥細胞株HepG2/adr為模型；MTT法檢測細胞毒效應；阿霉素，羅丹明123積累以流式細胞儀測定：蛋白表達測定用Western blotting；P

2、-gp在mRNA表達水平用RT-PCR法測定；化學發(fā)光法測定BIBF1120對P-gp ATPase活性的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 BIBF1120可濃度依賴性增加HepG2/adr細胞株對阿霉素和紫杉醇的敏感性，0.75，1.5和3μmol/L的BIBF1120可以使HepG2/adr細胞株對阿霉素的敏感性分別增加2.18、3.87和7.32倍，對紫杉醇的敏感性分別增加2.56、4.46和7.89倍。而對相應敏感細

3、胞株HepG2則無影響，也不改變非P-gp底物順鉑的細胞毒作用。0.75，1.5和3μmol/L的BIBF1120使阿霉素的熒光值在HepG2/adr細胞中分別增加了1.21、1.63和1.98倍，羅丹明123的熒光值分別增加了3.12、4.23和5.78倍，而阿霉素和羅丹明在相應敏感細胞HepG2中的積累未受影響。說明BIBF1120可影響藥物外排泵功能恢復P-gp介導的肝癌MDR細胞對傳統(tǒng)化療藥物的敏感性。
　　 BIBF1

4、120對下游ERK和AKT磷酸化水平的抑制常作為評價BIBF1120藥效的指標。我們的結(jié)果表明在HepG2和HepG2/adr細胞中BIBF1120在有效逆轉(zhuǎn)濃度下對Akt和Erk1/2的磷酸化水平?jīng)]有明顯阻斷作用，表明BIBF1120恢復P-gp高表達肝癌MDR細胞對化療藥物的敏感性不依賴于BIBF1120對ERK和AKT磷酸化的阻斷作用。
　　 Western blot和RT-PCR結(jié)果表明逆轉(zhuǎn)濃度的BIBF1120不影響P