人骨保護(hù)素的表達(dá)及生物活性研究.pdf

1、該研究首先采用RT-PCR方法獲得人OPG全長(zhǎng)編碼區(qū)基因:根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的人OPGcDNA的序列,設(shè)計(jì)針對(duì)其編碼區(qū)基因的引物,提取OPG基因mRNA表達(dá)水平高的人骨肉瘤細(xì)胞系MG63細(xì)胞的總RNA進(jìn)行RT-PCR,將擴(kuò)增得到的基因片段插入克隆載體pUC19中,酶切鑒定正確后進(jìn)行序列測(cè)定,結(jié)果證明得到的OPG編碼區(qū)基因與文獻(xiàn)報(bào)道完全一致,并且通過引物對(duì)基因兩側(cè)進(jìn)行了修飾.為研究OPG在真核細(xì)胞中的表達(dá),構(gòu)建了OPG真核表達(dá)載體pcDNA3-

2、OPG和pIRES-EGFP-OPG,轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成肌細(xì)胞株C2C12,篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染OPG編碼區(qū)基因的細(xì)胞系,經(jīng)Western blot檢測(cè)證實(shí)細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)OPG蛋白,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好.基因治療具有治療靶向性、蛋白持續(xù)表達(dá)、價(jià)格低等優(yōu)點(diǎn),腺病毒是目前骨病骨創(chuàng)傷基因治療研究領(lǐng)域中最常用、較為理想的載體.OPG和BMP-2在功能上的互補(bǔ),且BMP-2可促進(jìn)OPG的表達(dá),因此聯(lián)合應(yīng)用OPG和BMP-2,可以在骨髓微環(huán)境中發(fā)揮OPG抑制破骨