2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁(yè)
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1、目的:構(gòu)建攜帶人骨保護(hù)素(OPG)編碼基因（opg/TNFRSF11B）的大腸桿菌分支桿菌穿梭表達(dá)載體，培養(yǎng)卡介苗菌株，為進(jìn)一步以重組卡介苗(rBCG)為生物反應(yīng)器生產(chǎn)骨保護(hù)素奠定研究基礎(chǔ)。
　　 方法:1）針對(duì)opg DNA序列，設(shè)計(jì)兩端帶有EcoRI和ClaI限制性內(nèi)切酶切位點(diǎn)的上下游PCR引物;2）提取攜帶opg DNA序列的pMD18-T大腸桿菌質(zhì)粒作為PCR擴(kuò)增模板，PCR擴(kuò)增opg DNA序列，用EcoRI和ClaI

2、分別雙酶切PCR擴(kuò)增產(chǎn)物以及大腸桿菌分支桿菌穿梭表達(dá)載體（pMV361質(zhì)粒），回收目的基因以及載體片段并連接;3)限制性內(nèi)切酶切、PCR擴(kuò)增以及DNA測(cè)序方法驗(yàn)證表達(dá)載體構(gòu)建是否成功;4）使用液體蘇通培養(yǎng)基及改良羅氏培養(yǎng)基培養(yǎng)卡介苗菌株。
　　 結(jié)果:通過(guò)PCR方法將opg基因從pMD18-T質(zhì)粒上擴(kuò)增出來(lái)并與pMV361載體質(zhì)粒進(jìn)行重組連接，構(gòu)建了新的攜帶OPG編碼基因的大腸桿菌分支桿菌穿梭表達(dá)載體pMV361-opg;重組質(zhì)

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