重組質(zhì)粒pSecTag2-B-OPG在Beagle犬骨髓基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)與鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：利用pSecTag2/B-OPG真核分泌表達(dá)穿梭載體，建立經(jīng)骨保護(hù)素基因(Osteoprotegerin，OPG)修飾的Beagle犬骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bone marrow stromalcells，BMSCs)瞬時(shí)表達(dá)體系并檢測(cè)其表達(dá)能力，為基因工程與組織工程聯(lián)合治療牙周病提供細(xì)胞基礎(chǔ)。 方法：穿刺抽取成年Beagle犬骨髓約2-3ml，通過(guò)全骨髓貼壁法獲取BMSCs。傳代至第3代，脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染經(jīng)鑒定的重組質(zhì)粒pSecT

2、ag2/B-OPG，并用RT-PCR、Western-blotting檢測(cè)OPG的表達(dá)水平。 結(jié)果：重組質(zhì)粒pSecTag2/B-OPG經(jīng)HindⅢ單酶切及EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ雙酶切，電泳顯示切下的片段均與預(yù)期大小相符，經(jīng)測(cè)序證實(shí)此基因與Genbank中[gi：33873056]提供的序列一致；RT-PCR結(jié)果顯示：重組質(zhì)粒pSecTag2/B-OPG在骨髓基質(zhì)細(xì)胞中有轉(zhuǎn)錄；Western-blotting結(jié)果顯示：在39

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