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文檔簡介
1、研究表明,雌激素參與缺血性腦卒中的神經(jīng)保護作用。雌激素主要與雌激素受體結合,通過基因組模式或非基因組模式發(fā)揮生物學效應。新近發(fā)現(xiàn)的ER-α36是ER-α一個亞型,它廣泛表達在乳腺、卵巢、肝、骨等細胞和組織中,并可介導膜起始的雌激素信號通路。本室前期研究發(fā)現(xiàn),ER-α36也廣泛表達在腦內(nèi)多個區(qū)域,但作用尚不明確。
本實驗利用RNA干擾技術建立的ER-α36基因敲低細胞系,通過免疫細胞化學、免疫細胞熒光、MTT、Hoechst
2、染色、熒光素酶分析、Western blot等方法,探討了ER-α36在PC12細胞血清營養(yǎng)剝奪耐受性中的作用,為臨床預防和治療缺血性腦卒中提供實驗依據(jù)。
結果:
1.原代培養(yǎng)不同時間的皮層和海馬神經(jīng)元中均有ER-α36表達,且主要分布在胞漿和胞膜上,并與Caveolin-1共定位。原代培養(yǎng)的皮層神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元純度較高,NSE免疫陽性率均達到97%。
2.PC12細胞對血清營養(yǎng)剝奪的耐受具有
3、明顯的時間和血清濃度依賴性。細胞在含2.5%血清的無酚紅培養(yǎng)基中生長速度減慢,其存活率與正常培養(yǎng)PC12細胞相比顯著降低,以此可建立血清營養(yǎng)剝奪細胞模型;此外,細胞在血清剝奪(0.5%血清)2h時,不會發(fā)生凋亡。
3.敲低ER-α36,降低了細胞對低濃度E2的敏感性,增強了細胞血清營養(yǎng)剝奪的耐受性。其中,pM和nM級別的E2對PC12細胞促增殖作用減弱;PC12細胞血清營養(yǎng)剝奪4h開始凋亡,敲低ER-α36后細胞血清營養(yǎng)剝
4、奪8h開始凋亡。
4.ER-α36介導E2激活的MAPK信號通路影日向Pc12細胞的營養(yǎng)剝奪(低血清)耐受性。在PC12細胞中轉(zhuǎn)染ER-α36表達質(zhì)粒后再分別用不同濃度E2處理,與未用E2處理組相比,低濃度E2增強熒光素酶活性,10pM最為顯著ER-α36參與血清營養(yǎng)剝奪的細胞增殖和存活通路,并介導E2激活的MAPK/ERK和PI3K/Akt信號通路的交叉對話,同時介導低濃度E2激活的MAPK信號通路。
結論
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