2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   股骨頭壞死(Osteonecrosis of the Femoral Head,ONFH)是由于多種病因破壞股骨頭血供使骨的活性成分(包括骨細胞、骨髓造血細胞和脂肪細胞)死亡的一種病理過程。該病發(fā)病率高,若未經(jīng)有效治療,約80%的患者將在1~4年內(nèi)發(fā)生股骨頭塌陷,關(guān)節(jié)功能毀壞,最終不得不接受人工全髖關(guān)節(jié)置換。但由于該病多發(fā)于中青年,且多為雙側(cè)關(guān)節(jié)同時受累,中青年實行人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后遠期療效尚不理想。所以股骨頭壞死的

2、治療目標除了改善臨床癥狀外,更重要的是防止股骨頭塌陷,延緩病變發(fā)展,盡量保留患者自身的股骨頭,推遲甚至避免人工關(guān)節(jié)置換術(shù)。保留股骨頭的理想治療方法是既能有效改善股骨頭的血液供應,加強壞死骨的修復,又能恢復股骨頭的生物力學性能,防止塌陷。目前臨床上尚無達到上述要求的理想方法。本研究將骨髓間充質(zhì)干細胞和傘狀支撐骨植入山羊股骨頭壞死模型,通過影像學、組織學和生物力學檢查觀察其修復過程,探索一種新的治療股骨頭壞死的方法。
   本研究分

3、為三個部分。
   方法:
   第一部分:改良的液氮冷凍法建立山羊股骨頭壞死模型。12只健康1周歲中國青山羊均采用改良的液氮冷凍法隨機側(cè)別建立單側(cè)股骨頭壞死模型,采取髖關(guān)節(jié)后側(cè)入路,不脫位髖關(guān)節(jié),不切開關(guān)節(jié)囊,自關(guān)節(jié)囊邊緣向股骨頭負重區(qū)方向鉆孔,用棉簽蘸取液氮涂抹于孔內(nèi)冷凍。分別于造模術(shù)后2天、2周、4周、8周分批處死(每批3只)行放射學、組織學觀察。
   第二部分:山羊骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離、培養(yǎng)及鑒定。

4、取健康1周歲中國青山羊,髂骨穿刺抽取髂骨骨髓,采用密度梯度離心法分離骨髓間充質(zhì)干細胞,結(jié)合貼壁篩選法進行培養(yǎng)。觀察細胞形態(tài)及生長情況,測定細胞成活率及傳代細胞貼壁率,對第2,4,6代細胞采用連續(xù)計數(shù)法繪制出生長曲線,計算細胞倍增時間,免疫細胞化學染色法鑒定細胞表面抗原標志。
   第三部分:骨髓間充質(zhì)干細胞和傘狀支撐骨移植術(shù)治療股骨頭壞死的實驗研究。44只健康1周歲中國青山羊全部用改良的液氮冷凍法隨機側(cè)別制作單側(cè)股骨頭壞死模型。

5、造模8周后,隨機挑選2只處死,行放射學、組織學檢查檢測造模情況。余42只隨機分為A、B、C三組(每組14只),于模型側(cè)分組施術(shù)。A組為骨髓間充質(zhì)干細胞和傘狀支撐骨移植術(shù)組。采取髖關(guān)節(jié)后側(cè)入路進入,鑿取帶股方肌蒂骨柱,同時在取骨柱處鑿取4~6根帶皮質(zhì)骨的小骨柱,清除股骨頭內(nèi)死骨后取已制備好的山羊自身的骨髓間充質(zhì)干細胞懸液混合于小部分松質(zhì)骨植于股骨頭軟骨下,并于股骨頭內(nèi)的前、后、內(nèi)、外多方向植入4~6根小骨柱,中間植入帶股方肌蒂骨柱(大骨柱

6、),周圍空腔用松質(zhì)骨填充壓實,使這些骨柱支撐類似撐開的傘狀;B組為單純股方肌骨柱移植術(shù)組;C組為骨髓間充質(zhì)干細胞和松質(zhì)骨移植術(shù)組。徹底清除壞死骨,在壞死側(cè)股骨頭內(nèi)先植入其自身的骨髓間充質(zhì)干細胞,但是不植骨柱,僅為打壓植入松質(zhì)骨。三組的健側(cè)均作為自身正常對照。分別于術(shù)后3、6個月行放射學、組織學檢查及生物力學測定。
   結(jié)果:
   第一部分術(shù)后2天,股骨頭出現(xiàn)骨細胞壞死,X線檢查模型側(cè)可見低密度針道影;術(shù)后2周可見骨髓

7、纖維化,骨小梁周圍骨髓基質(zhì)細胞增多,X線顯示針道影模糊,模型側(cè)股骨頭無明顯骨壞死改變;4周時可見修復反應出現(xiàn),X線顯示股骨頭負重區(qū)出現(xiàn)囊性變,周圍骨質(zhì)硬化;8周時模型側(cè)股骨頭骨小梁變細、稀疏、斷裂、排列紊亂,骨細胞變性死亡,可見大量空骨陷窩,軟骨表面毛糙,部分脫落,軟骨下骨壞死區(qū)可見增生結(jié)締組織,X線顯示模型側(cè)股骨頭骨密度不均,負重區(qū)軟骨面輕度塌陷。各組正常側(cè)股骨頭均無異常變化。
   第二部分骨髓間充質(zhì)干細胞原代細胞呈“滿天星

8、”樣分布,圓形,大小均勻,周圍有少量血細胞。培養(yǎng)24h后部分細胞貼壁,呈橢圓形。48 h后更多細胞貼壁,呈梭形、多角形。4~6d后形成細胞集落,隨培養(yǎng)進行細胞集落逐漸增多,12~14d長滿瓶底80%,即可行細胞傳代。傳代后4h細胞貼壁,1—6代細胞12h貼壁率大于90%,24h貼壁率可達100%。6~8d長滿瓶底,細胞融合率可達100%,1—6代細胞成活率均大于95%。傳代細胞呈均一長梭形,細胞膜及細胞核清晰,細胞密度較高時呈放射狀、漩

9、渦狀排列。第2代骨髓間充質(zhì)干細胞免疫組化染色,細胞表面抗原CD29,CD44呈陽性表達(胞漿呈黃褐色染色),CD34,CD45呈陰性表達。生長曲線呈S型,1~2d為潛伏期;2~3d后進入對數(shù)增長期;6~7d后進入平臺期。第2,4,6代細胞倍增時間分別為25.61h,27.89h,28.66h,平均倍增時間為(27.38±2.03)h。
   第三部分治療術(shù)后3個月:(1)X線檢查:A組、B組手術(shù)側(cè)股骨頭外形恢復,囊性低密度區(qū)消失

10、,原塌陷已修復,股骨頭無再塌陷。A組植骨愈合良好,骨柱影己模糊;B組植骨愈合欠佳,骨柱影仍較清晰;C組手術(shù)側(cè)骨修復效果明顯較A組、B組差,股骨頭輪廓不規(guī)則,扁平塌陷,密度不均。(2)組織學觀察:A組骨小梁成熟,排列規(guī)則;B組骨小梁幼稚,排列不規(guī)則;C組骨小梁變細、稀疏、斷裂。①3組手術(shù)側(cè)和正常側(cè)股骨頭骨小梁面積分數(shù)百分比分別為:(40.18±2.71和41.90±2.52)、(36.21±2.46和41.56±2.35)、(31.42±

11、2.74和41.90±2.48)%。A組骨小梁面積分數(shù)百分比高于B組、C組(P<0.05),與正常側(cè)比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。②3組手術(shù)側(cè)和正常側(cè)空骨陷窩計數(shù)百分比分別為:(12.01±1.53和11.53±1.32)、(18.35±1.51和11.68±1.21)、(22.23±1.12和11.47±1.26)%。A組空骨陷窩計數(shù)百分比低于B組、C組(P<0.05),與正常側(cè)比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。(3)生物

12、力學檢測:3組手術(shù)側(cè)和正常側(cè)股骨頭軟骨下骨最大壓縮強度和平均彈性模量分別為:(77.43±2.65和120.60±4.18)、(64.43±1.55和84.85±2.31)、(42.10±1.25和54.72±2.09)MPa,(82.61±2.02和127.37±4.74)、(83.09±1.23和126.36±1.39)、(83.91±1.32和126.85±2.88)MPa。3組手術(shù)側(cè)和正常側(cè)股骨頭松質(zhì)骨的最大壓縮強度和平均彈性模

13、量分別為:(46.63±1.32和81.74±3.96)、(39.48±0.75和63.78±1.27)、(30.83±0.73和45.90±2.34)MPa,(48.75±0.72和87.77±2.01)、(48.65±0.83和86.42±1.39)、(48.78±0.72和87.34±1.61)MPa。A組手術(shù)側(cè)股骨頭軟骨下骨、松質(zhì)骨的最大壓縮強度和平均彈性模量高于B組、C組(p<0.05),與正常側(cè)比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.

14、05)。治療術(shù)后6個月:X線檢查A組、B組手術(shù)側(cè)股骨頭已為正常股骨頭X線表現(xiàn),而C組手術(shù)側(cè)股骨頭已完全塌陷。組織學檢查A組、B組手術(shù)側(cè)股骨頭空骨陷窩計數(shù)百分比、骨小梁面積分數(shù)百分比與正常側(cè)比較差異已無統(tǒng)計學意義(P>0.05),且A、B組差異亦無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。生物力學測試顯示A組、B組手術(shù)側(cè)股骨頭軟骨下骨、松質(zhì)骨的最大壓縮強度和平均彈性模量與正常側(cè)比較差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05),且A、B組差異亦無統(tǒng)計學意義(p>0.

15、05)
   結(jié)論:
   第一部分采用改良的液氮冷凍法可以制作出股骨頭壞死伴關(guān)節(jié)面輕度塌陷的動物模型。該造模方法動物死亡率低,壞死成功率高,操作簡單,創(chuàng)傷較小,可重復性大,不破壞關(guān)節(jié)面及髖關(guān)節(jié)的穩(wěn)定性,適合模擬臨床上開窗減壓植骨治療股骨頭壞死的實驗研究。
   第二部分應用密度梯度離心法結(jié)合貼壁培養(yǎng)法獲得的山羊骨髓間充質(zhì)干細胞純度較高,生長狀態(tài)良好。通過免疫細胞化學染色法鑒定細胞表面抗原標志,結(jié)合細胞生物學特性

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