大鼠可控制頸動(dòng)脈狹窄模型建立及認(rèn)知功能變化研究.pdf

1、背景和目的：腦血管病(CerebraVascularDisease，CVD)是人類健康的一大殺手，其中絕大部分為缺血性腦血管病(IschemicCerebraVascularDisease，ICVD)，具有高發(fā)病率、高致殘率、高致死率及高復(fù)發(fā)率的特點(diǎn)。 頸動(dòng)脈狹窄是ICVD的重要危險(xiǎn)因素，頸動(dòng)脈狹窄與ICVD發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有著密切的關(guān)系，頸動(dòng)脈狹窄可以通過(guò)栓塞機(jī)制及血流動(dòng)力學(xué)機(jī)制導(dǎo)致ICVD。近年來(lái)，人們開(kāi)始關(guān)注頸動(dòng)脈狹窄在血

2、管性認(rèn)知功能損害(VascularCognitiveImpairment，VCI)的發(fā)生、發(fā)展中的重要作用，認(rèn)為頸動(dòng)脈狹窄與認(rèn)知功能下降有關(guān)，但頸動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙的確切機(jī)制尚不清楚?；陬i動(dòng)脈狹窄在ICVD及認(rèn)知功能變化中所起的作用，頸動(dòng)脈狹窄的研究越來(lái)越受到人們的重視。但既往國(guó)內(nèi)外開(kāi)展的關(guān)于頸動(dòng)脈狹窄的系列研究多限于臨床且不甚全面，而實(shí)驗(yàn)研究開(kāi)展的相對(duì)較少，所以許多問(wèn)題尚未明確，積極開(kāi)展頸動(dòng)脈狹窄的實(shí)驗(yàn)研究尤為重要。目前國(guó)內(nèi)外

3、主要靠經(jīng)皮動(dòng)脈球囊擴(kuò)張法、干燥氣體損傷法、電刺激外膜加球囊擴(kuò)張法等建立頸動(dòng)脈狹窄動(dòng)物模型，盡管這些模型具有一定的應(yīng)用價(jià)值，但其狹窄程度難以控制，加之形成狹窄的時(shí)間較長(zhǎng)，所以現(xiàn)有的動(dòng)物模型制約了動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究的開(kāi)展。所以，建立理想的頸動(dòng)脈狹窄模型，對(duì)頸動(dòng)脈狹窄導(dǎo)致的病理生理變化及干預(yù)的研究十分必要。 為此，我們嘗試制作了一種Wistar大鼠頸動(dòng)脈狹窄模型，并采用水迷宮行為測(cè)試、P300電生理檢測(cè)、神經(jīng)遞質(zhì)測(cè)定及病理檢查等綜合方法，觀

4、察頸動(dòng)脈狹窄與大鼠的認(rèn)知功能改變的關(guān)系，并從病理及生化(神經(jīng)遞質(zhì))的角度，探討認(rèn)知功能變化的可能機(jī)制，旨在揭示頸內(nèi)動(dòng)脈狹窄引起認(rèn)知功能損害的有關(guān)機(jī)制及物質(zhì)基礎(chǔ)，同時(shí)也為臨床血管性癡呆提供理論依據(jù)。 方法：利用不同型號(hào)的針與線將雙側(cè)頸總動(dòng)脈不完全結(jié)扎建立不同狹窄程度的頸動(dòng)脈狹窄模型，并利用DSA頸動(dòng)脈血管造影與計(jì)算機(jī)圖形處理系統(tǒng)進(jìn)行狹窄的定性與定量研究。于2周、1月、2月、3月四個(gè)時(shí)相點(diǎn)對(duì)重度頸動(dòng)脈狹窄大鼠進(jìn)行水迷宮行為測(cè)試、7P

5、300電生理檢測(cè)、神經(jīng)遞質(zhì)測(cè)定及病理檢查以判定其認(rèn)知功能改變情況。采用SPSSl0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1.DSA頸動(dòng)脈血管造影：造影劑能通過(guò)狹窄處，可以清晰地顯示狹窄的存在。 2.狹窄程度測(cè)量：通過(guò)計(jì)算機(jī)圖形處理系統(tǒng)測(cè)量，證實(shí)制作出了重度、中度兩種狹窄模型，狹窄率分別為92.87±2.92％、66.19±5.37％。 3.Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)：經(jīng)過(guò)t檢驗(yàn)，2周、1月、2月、3月四個(gè)

6、時(shí)相點(diǎn)狹窄組與假手術(shù)對(duì)照組逃避潛伏期相比均存在著非常顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，提示四個(gè)時(shí)相點(diǎn)狹窄組逃避潛伏期較假手術(shù)對(duì)照組延長(zhǎng)。分別對(duì)兩組4個(gè)時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果顯示每組四個(gè)時(shí)相點(diǎn)的潛伏期兩兩之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，說(shuō)明隨狹窄時(shí)間的延長(zhǎng)逃避潛伏期無(wú)明顯變化。 4.Morris水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)：四個(gè)時(shí)相點(diǎn)狹窄組與假手術(shù)對(duì)照組在原平臺(tái)象限游泳距離百分比相比均有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，說(shuō)明狹窄組

7、大鼠原平臺(tái)象限游泳距離百分比明顯小于假手術(shù)對(duì)照組。分別對(duì)兩組4個(gè)時(shí)相點(diǎn)進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果顯示每組四個(gè)時(shí)相點(diǎn)的原平臺(tái)象限游泳距離百分比兩兩之間均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，提示隨狹窄時(shí)間延長(zhǎng)原平臺(tái)象限游泳距離百分比無(wú)明顯變化。 5.P300檢測(cè)：四個(gè)時(shí)相點(diǎn)狹窄組與假手術(shù)對(duì)照組潛伏期相比有非常顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，說(shuō)明狹窄組大鼠P300潛伏期明顯長(zhǎng)于假手術(shù)對(duì)照組。而狹窄組潛伏期隨著時(shí)間延長(zhǎng)潛伏期也相應(yīng)延長(zhǎng)：1月、

8、2月、3月潛伏期明顯長(zhǎng)于2周潛伏期(P＞0.05)，1月、2月潛伏期無(wú)顯著差異(P＞0.05)，3月潛伏期延長(zhǎng)更為明顯，與1月、2月相比有非常顯著性差異(P＜0.01)。 6.皮層、海馬神經(jīng)遞質(zhì)變化：①狹窄組與假手術(shù)組比較：除1月5-HT、DA及2月DA狹窄組與假手術(shù)對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異外(P＞0.05)，其余狹窄組神經(jīng)遞質(zhì)在四個(gè)時(shí)相點(diǎn)與假手術(shù)對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，提示頸動(dòng)脈狹窄后神經(jīng)遞質(zhì)含量有所下降。②

9、每種神經(jīng)遞質(zhì)在四個(gè)時(shí)相點(diǎn)的變化。NE：2周時(shí)明顯降低，1月時(shí)又上升至1057±29.25ng/g，之后開(kāi)始下降，2月時(shí)降至846±97.22ng/g，明顯低于1月時(shí)含量(P＜0.01)，但仍高于2周時(shí)含量，3月時(shí)降至681±38.24ng/g，明顯低于1月、2月組(P＜0.01)，但與2周時(shí)相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；DA：四個(gè)時(shí)相點(diǎn)間兩兩相比無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，提示隨著時(shí)間延長(zhǎng)DA含量無(wú)明顯變化。5-HT：2周時(shí)

10、明顯降低，1月時(shí)明顯升高，明顯高于2周時(shí)含量(P＜0.01)，2、3月呈下降趨勢(shì)，明顯低于1月時(shí)含量(P＜0.05)，但與2周時(shí)相比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)?？傮w呈現(xiàn)2周時(shí)降低，1月8時(shí)有所升高，2、3月又降低的趨勢(shì)。 7.病理改變：頸動(dòng)脈狹窄可造成海馬和皮層神經(jīng)元缺血改變，1個(gè)月時(shí)病變不明顯，2周、2月、3月時(shí)較明顯。 結(jié)論：1.采用針線法能成功建立頸動(dòng)脈狹窄模型，狹窄程度可以控制且穩(wěn)定，模型具有操作簡(jiǎn)單、成模快、