Wistar大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后再狹窄模型建立及載脂蛋白J與再狹窄的關(guān)系研究.pdf

1、目的：建立一個(gè)穩(wěn)定可靠的再狹窄的大鼠動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上觀察載脂蛋白J（Apolipoprotein J, Apo J）在再狹窄中表達(dá)的變化，探討Apo J與再狹窄的關(guān)系及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：Wistar大鼠40只，分為實(shí)驗(yàn)組20只，對(duì)照組20只。經(jīng)鎖骨下靜脈注射肝素后，實(shí)驗(yàn)組用2F Fogarty球囊導(dǎo)管于右側(cè)頸總動(dòng)脈進(jìn)行球囊拉傷，對(duì)照組做假手術(shù)。分別于術(shù)后第1、2、3、4周取靜脈血并處死大鼠，取出右側(cè)頸總動(dòng)脈全段，取

2、其中0.3cm包埋在10％中性福爾馬林中以備病理檢測(cè)，余下血管段在液氮中速凍，并轉(zhuǎn)入-80℃冰箱，為生化檢測(cè)備用。HE染色法觀察右側(cè)頸總動(dòng)脈的形態(tài)學(xué)變化，免疫組化的方法檢測(cè)Apo J蛋白在右側(cè)頸總動(dòng)脈中表達(dá)的部位及變化的趨勢(shì)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)血清中Apo J的水平，real-time PCR的方法檢測(cè)右側(cè)頸總動(dòng)脈中Apo J mRNA表達(dá)的水平。
　　結(jié)果：①使用本造模方法實(shí)驗(yàn)組的大鼠存活17只，存活率85%，存

3、活的大鼠右側(cè)頸總動(dòng)脈均可以觀察到內(nèi)膜的增生，造模成功。平均手術(shù)時(shí)間34.19±6.09分鐘。②HE染色：頸動(dòng)脈損傷后內(nèi)膜出現(xiàn)明顯增厚，增厚的程度隨著時(shí)間逐漸加重?？梢姶罅康难芷交。╒SMC）向內(nèi)膜遷移，其增殖和遷移的活性較強(qiáng)。在術(shù)后第4周時(shí)管壁側(cè)的VSMC增殖活性開始下降。測(cè)量?jī)?nèi)膜/中膜面積比（internal/medial, I/M）來表示內(nèi)膜增厚的程度，對(duì)照組的I/M接近于0，術(shù)后實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)的I/M均大于對(duì)照組（P＜0.05

4、），第4周的I/M（2.61±1.12）最大，與第1（0.63±0.04）、2周（1.08±0.29）相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。③免疫組化：實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)均可檢測(cè)到Apo J蛋白，多表達(dá)于中膜及新生內(nèi)膜的VSMC的胞漿中，實(shí)驗(yàn)組3周Apo J蛋白的表達(dá)最強(qiáng)，4周出現(xiàn)下降，對(duì)照組的血管全層未能檢測(cè)到Apo J蛋白。④ELISA：對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組血清Apo J在手術(shù)前后均無顯著差異。⑤real-time PCR:第1周時(shí)實(shí)驗(yàn)組Apo

5、J mRNA水平與對(duì)照組之間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.254）；第2周時(shí)實(shí)驗(yàn)組Apo J mRNA的表達(dá)顯著高于對(duì)照組（7.58±1.91 vs0.91±0.17, P=0.006）；在第3周時(shí)實(shí)驗(yàn)組Apo J mRNA的表達(dá)達(dá)到高峰（8.49±2.24 vs0.98±0.21, P=0.007）；在第4周時(shí)實(shí)驗(yàn)組Apo J mRNA開始下降，但仍高于對(duì)照組（3.85±0.96 vs1.05±0.35, P＜0.001）。
　　結(jié)論

6、：本研究所用的造模方法簡(jiǎn)單實(shí)用，可重復(fù)性強(qiáng)，大鼠存活率及成模率高。大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后的內(nèi)膜增生主要由VSMC向內(nèi)膜遷移及增殖導(dǎo)致，新生內(nèi)膜中VSMC增殖和遷移的活性較強(qiáng)，但在第4周下降。損傷血管中的Apo J mRNA及蛋白在損傷血管的VSMC中表達(dá)顯著升高，均在第3周最高，第4周下降。提示Apo J與血管損傷及損傷后內(nèi)膜增生密切相關(guān)。血管中高表達(dá)的Apo J主要來源于損傷組織局部的VSMC合成而非來源于系統(tǒng)表達(dá)，局部合成Apo J的