氟西汀促進(jìn)腦神經(jīng)功能修復(fù)的機(jī)制研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師( 或指導(dǎo)小組) 的指導(dǎo)下，由本人獨(dú)立完成。本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對(duì)本學(xué)位論文進(jìn)行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試驗(yàn)材料、原始數(shù)據(jù)、 申報(bào)的專利等知識(shí)產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。否則，承輝鞭法律責(zé)任。 F ＼ 疊t 1 ．o j ．j研究生虢騷嘶翩簽鉚塢學(xué)院領(lǐng)龜：。力D

2、／≥年淞J 7 1 日河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。本論文由本人獨(dú)立撰寫，文責(zé)自負(fù)。蹴蚣轢弓嘶導(dǎo)師簽章：≯汐I(xiàn) ≥中文摘要氟西汀促進(jìn)腦神經(jīng)功能修復(fù)的機(jī)制研究摘 要目的：研究氟西汀( F l u o x e t i n e ) 改善腦神經(jīng)功能方面具有的作用與腦組織神經(jīng)干細(xì)胞( n

3、e u r a l s t e mc e l l ，N S C ) 之間所存在的聯(lián)系，進(jìn)而探索氟西汀在改善修復(fù)腦神經(jīng)功能方面可能存在的機(jī)制。方法：1 新生大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)和鑒定：在參考已有大鼠神經(jīng)干細(xì)胞分離和培養(yǎng)研究的基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)采用無血清培養(yǎng)技術(shù)，并改進(jìn)實(shí)驗(yàn)中多項(xiàng)操作方法( 如分離傳代N S C 時(shí)采用機(jī)械分離的方法，這樣能保證一部分原代細(xì)胞不受胰酶損害；培養(yǎng)干細(xì)胞時(shí)給予一定的高密度，促進(jìn)干細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖) ，從新生大鼠海馬

4、腦組織分離培養(yǎng)出具有分裂增殖能力的細(xì)胞。2 氟西汀刺激神經(jīng)干細(xì)胞產(chǎn)生的影響( 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及標(biāo)本檢測(cè)) ：將傳代培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞分別接種于小號(hào)培養(yǎng)皿中，細(xì)胞濃度為( 4 ～5 ) x 1 0 5 ／m l ，每個(gè)培養(yǎng)皿接種3 m l ，每組接種3 個(gè)培養(yǎng)皿，共接種1 5 個(gè)小培養(yǎng)皿，均應(yīng)用無血清條件培養(yǎng)基培養(yǎng)，按氟西汀臨床穩(wěn)態(tài)血藥濃度( 5 0 0 n m o l ／L ) 分別加入不同終濃度的氟西汀進(jìn)行分組，分組為：①空白對(duì)照組( 加

5、入等體積的P B S 作為C o n t r o l 組) ②氟西汀低劑量組( 濃度為lO O n m o l ／L ) ③氟西汀中劑量組( 臨床穩(wěn)態(tài)血藥濃度組，5 0 0 n m o l ／L ) ④氟西汀高劑量組( t 0 0 0n m o l ／L ) ⑤氟西汀超高劑量組( 5 0 0 0n m o l ／L ) 。分別應(yīng)用R T ．P C R 方法和W e s t e r n b l o t 方法檢測(cè)各組神經(jīng)干細(xì)胞膠質(zhì)源性神經(jīng)營(yíng)

6、養(yǎng)因子G D N F 和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子B D N Fm R N A 和蛋白的表達(dá)水平的差異。3 應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組神經(jīng)干細(xì)胞膠質(zhì)纖維酸性蛋白( G F A P ) 陽性細(xì)胞百分率之間的差異，各種結(jié)果的差異應(yīng)用S P S S1 3 ．0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，尸值均< O ．0 5 。結(jié)果：1 體外培養(yǎng)條件下從新生大鼠海馬腦組織成功分離培養(yǎng)出具有分裂增殖能力的細(xì)胞，n e s t i n 免疫組化染色顯示n e s t i n