椎體終板下微循環(huán)障礙導(dǎo)致椎間盤退變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、下腰痛(LOW Back Pain，LBP)是脊柱外科的常見病、多發(fā)病。資料表明：美國人一生中發(fā)生下腰痛的概率為60﹪～80﹪，在成人喪失勞動能力的諸多原因中，下腰痛位居第三位。目前認(rèn)為，椎間盤退變(Intervertebral DiskDegeneration，IvDD)為LBP的主要病因，椎間盤退變的相關(guān)研究也成為脊柱外科的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域，其中，通過誘致椎間盤退變構(gòu)建動物模型以探討椎間盤退變的發(fā)病機(jī)制是主要研究方向之一。 根據(jù)

2、目前文獻(xiàn)復(fù)習(xí)，對椎間盤退變發(fā)病機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究多集中于椎間盤本身，即通過對椎間盤本身干預(yù)，如改變機(jī)械應(yīng)力或進(jìn)行結(jié)構(gòu)破壞，誘致椎間盤退變發(fā)生。我們將注意力轉(zhuǎn)移至椎體終板血運(yùn)障礙與椎間盤退變的關(guān)系，通過藥物干預(yù)導(dǎo)致椎體終板下微血栓形成，構(gòu)成微循環(huán)障礙，進(jìn)而評估椎間盤退變的程度，從而揭示椎體終板下微循環(huán)障礙與椎間盤退變之間的關(guān)系，為探討椎間盤退變的發(fā)病機(jī)制提供新的研究思路。 第一部分：椎體終板下微循環(huán)障礙動物模型的構(gòu)建目的：通過藥物干預(yù)

3、，導(dǎo)致椎體終板下微血栓形成，構(gòu)建椎體終板下微循環(huán)障礙動物模型。 方法：將一定數(shù)量新西蘭白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，兩組各取1只動物行腰椎血管鑄型觀察。實(shí)驗(yàn)組在急性期內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)毒素與激素，間隔24h靜脈推注內(nèi)毒素，每次20μg/kg，共注射2次；于第二次注射內(nèi)毒素24h后肌內(nèi)注射甲潑尼龍10mg/kg，間隔24h再次肌內(nèi)注射同樣劑量。對照組動物于相同時(shí)間相同途徑注射與實(shí)驗(yàn)組等體積生理鹽水。給藥完畢后腰椎取材，行椎體終板組織切片并

4、微血栓染色證實(shí)。結(jié)果：急性期聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)毒素與激素后，終板微血栓染色可見大量藍(lán)染團(tuán)塊樣物質(zhì)，為纖維素物質(zhì)，即微血栓，證實(shí)實(shí)驗(yàn)組動物椎體終板下形成大量微血栓。 結(jié)論：通過急性期聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)毒素與激素，可導(dǎo)致椎體終板下微血栓形成，可借助此方法成功構(gòu)建椎體終板下微循環(huán)障礙動物模型。 第二部分：椎體終板下微循環(huán)障礙導(dǎo)致椎間盤退變的研究目的：通過急性期構(gòu)建椎體終板下微循環(huán)障礙動物模型，并在慢性期持續(xù)口服激素，評估椎間盤退變程度，從而證

5、實(shí)椎體終板下微循環(huán)障礙是導(dǎo)致椎間盤退變的原因之一，揭示椎間盤退變的發(fā)病機(jī)制。 方法：將一定數(shù)量新西蘭白兔隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，實(shí)驗(yàn)組首先采用急性期聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)毒素與激素的方法制備典型椎體終板下微循環(huán)障礙動物模型，然后給予慢性期口服激素3個月，維持椎體終板的低血流狀態(tài)；對照組為陰性空白對照，不給予任何藥物干擾，僅標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。3個月后，對實(shí)驗(yàn)組和對照組動物椎間盤的退變程度進(jìn)行評估，評估指標(biāo)包括3個方面：通過椎間盤自然脫水計(jì)算椎間盤

6、水含量；通過RT-PCR測定髓核生化成分(包括Aggrecan、Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原)mRNA表達(dá)量，間接反映該3種生化成分在髓核中的含量；以及通過椎間盤和椎體終板組織橫向切片染色，觀察椎間盤纖維環(huán)、髓核和椎體終板的組織形態(tài)學(xué)表現(xiàn)。 結(jié)果：經(jīng)急性期聯(lián)合應(yīng)用內(nèi)毒素與激素和慢性期持續(xù)口服激素后，實(shí)驗(yàn)組動物椎間盤水含量、生化成分(包括Aggrecan、Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原)含量均低于對照組，椎間盤切片染色可見椎間盤退變的表現(xiàn)，如纖維環(huán)結(jié)構(gòu)