HDAC抑制因子VPA在促進白血病細胞分化、凋亡和增強NK細胞殺傷敏感性中的作用研究.pdf

1、目的：
　　 本實驗以人急性早幼粒細胞白血病HL-60細胞株為研究對象,重點觀察丙戊酸鈉(VPA)對NK細胞殺傷白血病細胞敏感性的影響,及其增加NK細胞殺傷敏感性的分子機制。同時探討HDAC抑制因子VPA在促進全反式維甲酸(ATRA)誘導白血病細胞分化或促進冬凌草甲素(ORI)誘導白血病細胞凋亡中的作用。擬為臨床聯(lián)合應用VPA、小劑量ATRA或冬凌草甲素,減少藥物用量開辟新型生物治療模式。
　　 方法：
　　 取

2、對數(shù)生長期的HL-60細胞,分別加入不同濃度的ATRA或/和VPA,于37℃、5％CO2飽和濕度下培養(yǎng)1至3天,臺盼藍拒染實驗檢測細胞增殖變化,FACS實驗檢測細胞周期、凋亡變化,以及細胞表面CD11b表達變化;CFSE/PI雙染法FACS檢測NK-92細胞殺傷HL-60細胞活性,再通過FACS或RT-PCR檢測HL-60細胞表面NK細胞各類受體配體的蛋白及基因表達情況;取對數(shù)生長期的HL-60細胞,分別加入不同濃度的ORI或/和VPA

3、,于37℃、5％CO2飽和濕度下培養(yǎng)1至3天,采用細胞計數(shù)法測定ORI和VPA單獨和聯(lián)合應用時對細胞的生長抑制,并用Annexin V/PI雙標法流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。
　　 結(jié)果：
　　 單獨應用ATRA或VPA能夠明顯抑制HL-60細胞生長,阻滯細胞子G0/G1期,誘導細胞分化,VPA可以促進ATRA的誘導分化作用。進一步研究發(fā)現(xiàn)1mmol/L VPA聯(lián)合0.5μmol/L ATRA可增強HL-60細胞對NK細胞的

4、自然殺傷敏感性,并與上調(diào)HL-60細胞表面MHC-Ⅰ類相關(guān)分子(MICA/B,ULBP)和CD54的表達及下調(diào)HLA-ABC有關(guān);在VPA促進凋亡誘導方面,VPA可以協(xié)同ORI抑制HL-60細胞增殖,誘導細胞凋亡,兩者具有明顯的協(xié)同誘導白血病細胞凋亡作用(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 VPA可以明顯的促進ATRA誘導白血病HL-60細胞的分化作用,以及促進ORI對白血病細胞的凋亡作用。VPA聯(lián)合ATRA可以增強H

5、L-60細胞對NK細胞自然殺傷敏感性,這種效應可能是通過兩種藥物作用HL-60細胞后,升高NK細胞活化性受體配體的表達,降低NK細胞抑制性受體配體的表達,以及增加與NK粘附而實現(xiàn)的。本研究為臨床聯(lián)合應用VPA和小劑量ATRA以增加療效、降低不良反應提供了實驗和理論基礎(chǔ),同時可長期用于白血病的預防,控制殘留病灶,提高白血病細胞對宿主免疫監(jiān)視的敏感性,并為開發(fā)類似VPA的HDACi類藥物,治療惡性腫瘤提供了新的思路。并且ORI和VPA具有協(xié)