供者異源反應(yīng)性NK細(xì)胞對(duì)受者白血病細(xì)胞殺傷活性研究.pdf

1、殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)是主要表達(dá)于人類NK細(xì)胞和部分活化T細(xì)胞表面的一類受體，特異性識(shí)別并結(jié)合靶細(xì)胞表面的HLA—I類分子，傳導(dǎo)抑制或激活信號(hào)。KIR基因位于人類染色體19q13．4的白細(xì)胞受體復(fù)合體(LRC)內(nèi)。KIR按結(jié)構(gòu)分為2個(gè)和3個(gè)(KIR2D和KIR3D)免疫球蛋白樣胞外區(qū)，根據(jù)胞漿區(qū)結(jié)構(gòu)域的不同分為有免疫受體酪氨酸活化基序(ITAM)的活化性受體(KIR2DS和KIR3DS)和有免疫受體酪氨酸抑制基序(ITIM)

2、的抑制性受體(KIR2DL和KIR3DL)。KIR特異性識(shí)別不同的HLA分子，KIR2DLl／KIR2DSl結(jié)合HLA-C第2組(Cw2、Cw4、Cw5、Cw6、Cwl7、Cwl8)，特點(diǎn)是在MHCQl螺旋上77(Asn)和80(Lys)。KIR2DL2和KIR2DL3識(shí)別HLA-C第1組(Cwl、Cw3、Cw7、Cw8、Cwl3、Cwl4)特點(diǎn)是77(Ser)和80(Asn)；KIR3DLl識(shí)別HLA_BBw4；KIR3DL2識(shí)別HL

3、A-A3、HLA-A1l；KIR2DL4識(shí)別HLA-G。 KIR基因在不同個(gè)體間表達(dá)具有豐富的多樣性。在NK細(xì)胞的發(fā)育過程中KIR基因的表達(dá)是隨機(jī)選擇的，不同的HLA分子選擇具有可以識(shí)別自身抗原KIR受體的NK細(xì)胞。結(jié)果當(dāng)KIR不能識(shí)別來自不同個(gè)體的HLA—I類分子時(shí)就會(huì)產(chǎn)生異源反應(yīng)性，反之當(dāng)KIR能夠識(shí)別來自不同個(gè)體的HLA—I類分子時(shí)就會(huì)產(chǎn)生免疫耐受。 眾多臨床移植資料和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證據(jù)提示，同種異源反應(yīng)性NK細(xì)胞對(duì)于異

4、基因造血干細(xì)胞移植預(yù)后具有諸多有利影響：促進(jìn)移植物植入，調(diào)節(jié)抗原遞呈細(xì)胞(APC)從而降低移植物抗宿主病(GVHD)的發(fā)生率，識(shí)別和攻擊宿主白血病細(xì)胞發(fā)揮移植物抗白血病(GVL)效應(yīng)降低移植后白血病的復(fù)發(fā)率。目前基于臨床規(guī)模的NK純化收集研究成功使得NK細(xì)胞輸注已開始應(yīng)用于異基因造血干細(xì)胞移植的治療，初步結(jié)果顯示NK細(xì)胞治療是安全的。UharekL等已經(jīng)報(bào)道成功收集和純化NK細(xì)胞達(dá)到107&g以上的臨床應(yīng)用數(shù)量以滿足臨床輸注的目的。對(duì)于

5、由于某些原因無法進(jìn)行異基因造血干細(xì)胞移植的惡性血液病患者和自體造血干細(xì)胞移植患者進(jìn)行自體或異源反應(yīng)性NK細(xì)胞輸注的免疫治療已取得初步成果。 異源反應(yīng)性NK細(xì)胞對(duì)于異基因造血干細(xì)胞移植的GVL作用主要是供者造血干細(xì)胞植入后分化而來的NK細(xì)胞產(chǎn)生的。但在促進(jìn)植入以及惡性血液病免疫治療中，目前是直接輸注體外純化的NK細(xì)胞，這種未經(jīng)擴(kuò)增的成熟細(xì)胞對(duì)白血病靶細(xì)胞殺傷活性能夠達(dá)到有效臨床治療目的嗎?眾多NK細(xì)胞殺傷活性的實(shí)驗(yàn)都是體外增殖后的

6、NK細(xì)胞對(duì)敏感的細(xì)胞系如K562等作為靶細(xì)胞的殺傷，體外純化的NK細(xì)胞對(duì)白血病患者體內(nèi)的惡性細(xì)胞殺傷活性如何呢? 本研究旨在研究供者異源反應(yīng)性NK細(xì)胞對(duì)受者白血病細(xì)胞的體外殺傷作用。首先采用PCR-SSP方法對(duì)收治的進(jìn)行HLA高分辨配型的初治急性髓性白血病患者的供者進(jìn)行5種抑制型KIR基因的檢測(cè)及其與受者HLA基因相合情況進(jìn)行分析，篩選出5例受者及其10例供者，分為KIR相合組和KIR不合組兩組實(shí)驗(yàn)組。制備凍存初治急性髓性白血病

7、患者新鮮的骨髓白血病細(xì)胞。利用免疫磁珠分離法陰性分離、純化供者外周血NK細(xì)胞。最后利用3H-TDR方法比較兩組供者體外純化的外周血NK細(xì)胞對(duì)受者白血病細(xì)胞的殺傷活性差異。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)免疫磁珠分離法可以得到較高純度的CD3-CD(16+56)+NK細(xì)胞，由從分離前2．32-15．36％提高到分離后88．23-94．2％，細(xì)胞存活率平均值>90％，細(xì)胞回收率平均值>65％。3H-TDR方法比較KIR相合組和不相合組對(duì)受者白血病細(xì)胞的殺

8、傷差異結(jié)果發(fā)現(xiàn)：KIR不相合組四個(gè)不同效靶比情況下對(duì)受者白血病細(xì)胞殺傷活性均明顯高于KIR相合組。KIR不相合組不同效靶比之間兩兩比較結(jié)果提示：與5：1組比較其它3組效靶比情況下對(duì)白血病細(xì)胞殺傷具有明顯差異，與10：1組比較25：1和50：1均有明顯差異，25：1與50：1兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在KIR相合組無論任何一個(gè)效靶比都未見NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞明顯的殺傷，即使效靶比達(dá)到50：1也未發(fā)現(xiàn)明顯的殺傷效應(yīng)，同時(shí)在效靶比10：l和25：