免疫調(diào)節(jié)肽對白血病細胞增殖、凋亡與分化的作用研究.pdf

1、胸腺肽α<,1>(Tα<,1>)，是一種包含28個氨基酸序列的多肽，在許多疾病的治療中作為免疫增強劑使用。本實驗我們研究Tα<,1>對三種白血病細胞株(HL-60細胞，K562細胞和K562/ADM細胞)的增殖和凋亡的作用。方法：應(yīng)用生長曲線測定法，檢測不同濃度的Tα<,1>對三種白血病細胞株(HL-60細胞，K562細胞和K562/ADM細胞)增殖的影響；采用Wright’s-Giemsa 染色觀察細胞形態(tài)學(xué)的變化；用流式細胞儀檢測T

2、α<,1>對白血病細胞凋亡率的影響以及對細胞CD95(Fas/Apol)和bcl-2基因表達的影響；利用乙酰膽堿受體拮抗實驗研究Tα<,1>對白血病細胞的作用機制。結(jié)果：Tα<,1>孵育白血病細胞96h后，細胞的增殖得到明顯抑制，細胞形態(tài)表現(xiàn)出明顯的凋亡特征，如染色質(zhì)濃縮，出現(xiàn)凋亡小體等：另外在凋亡的細胞中觀察到CD95(Fas/Apol)表達的上調(diào)，bcl-2抑凋亡基因表達的減少；Tα<,1>能微弱的抑制K562/ADM細胞 P-糖蛋

3、白(P-gp)的表達和功能；對于Tα<,1>的作用，K562細胞和K562/ADM細胞要比HL-60細胞敏感，而三種白血病細胞株要比肝癌細胞株HepG-2更敏感；D-tubocurarine(TUB)，一種nAchRs拮抗劑，能顯著拮抗Tα<,1>對白血病細胞增殖的抑制作用，而阿托品，一種mAchRs拮抗劑卻沒有這種拮抗作用。這些結(jié)果顯示，Tα<,1>能明顯抑制白血病細胞的增殖和誘導(dǎo)其凋亡，這種作用是通過N型乙酰膽堿受體的活化實現(xiàn)的。

4、 胸腺五肽(Arg-Lys-Asp-Val-Tyr，TP5)是人工合成的，在人體內(nèi)具有免疫調(diào)節(jié)活性的五肽。本實驗主要研究TP5在體外對人白血病細胞株HL-60、K562和K562/ADM細胞增殖、凋亡與分化的影響。方法：應(yīng)用生長曲線測定法，檢測不同濃度的TP5對HL60、K562和K562/ADM細胞增殖的影響；采用半固體培養(yǎng)基中克隆形成實驗，檢測 TP5 對細胞惡性增殖的抑制作用；硝酸銀染色檢測AgNORs變化；根據(jù)硝基藍四氮唑

5、(NBT)還原能力和聯(lián)苯胺染色來測定白血病細胞的分化；用流式細胞儀檢測細胞周期的分布，凋亡率的變化以及細胞表面抗原CD11b，CD14表達，觀察TP5對白血病細胞(HL60和K562)凋亡與分化的作用；利用乙酰膽堿受體拮抗實驗研究TP5對HL60細胞的作用機制；利用試劑盒測定白血病細胞 TNF 的分泌和細胞內(nèi)堿性磷酸酶的活性。結(jié)果：TP5 能濃度依賴性地抑制HL60細胞的增殖和半固體培養(yǎng)基中的克隆形成；TP5 作用后能夠使HL60細胞內(nèi)

6、的 AgNORs 減少或消失；細胞周期分析發(fā)現(xiàn)，不同濃度的 TP5 對HL60 細胞增殖的抑制，伴隨著細胞進程阻滯于 G0/G1期；TP5能顯著增強HL60細胞NBT還原能力；用流式細胞儀熒光染色分析，TP5能誘導(dǎo)HL-60細胞向粒細胞分化；TUB能明顯拮抗 TP5對HL60 細胞的增殖的抑制作用，而阿托品卻沒有這種拮抗作用，說明TP5通過N型乙酰膽堿受體的活化抑制HL60細胞的增殖。TP5能濃度依賴性地抑制K562細胞的惡性增殖和半固