哇巴因調(diào)節(jié)白血病細胞增殖的作用與相關(guān)分子機制的研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分：哇巴因?qū)Π籽〖毎鲋撑c鈉泵α1 亞單位表達的影響
　　 目的：近年來研究表明鈉鉀ATP酶可通過與強心甾類固醇（CTS）特異性結(jié)合，激活細胞內(nèi)一系列信號級聯(lián)反應(yīng)，調(diào)節(jié)細胞的增殖與凋亡。本研究通過檢測不同濃度的哇巴因?qū)Χ喾N白血病細胞株增殖的影響，進一步探討白血病的發(fā)病機制。并研究鈉鉀ATP酶作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)體的功能效應(yīng)以及其在細胞增殖調(diào)控過程中的作用。
　　 方法：采用MTT方法檢測

2、不同濃度的哇巴因（1nmol/L、10nmol/L）在不同作用時間（6h、12h、24h）下對多種白血病細胞株增殖的影響，Western-blot檢測白血病細胞株鈉鉀ATP酶α1 亞單位表達水平的變化情況。
　　 結(jié)果：MTT結(jié)果表明1nmol/L、10nmol/L 哇巴因均可促進急性淋巴細胞白血病細胞株B95與巨核系白血病Meg01細胞株增殖，Western-Blot結(jié)果顯示1nmol/L、10nmol/L 哇巴因均可使鈉鉀A

3、TP酶α1 亞單位表達升高。與空白對照組相比，1nmol/L、10nmol/L 哇巴因作用24h時白血病細胞增殖程度與鈉鉀ATP酶α1 亞單位表達升高程度差異具有顯著性（P<0.05）。哇巴因促進白血病細胞增殖作用及鈉鉀ATP酶α1亞單位表達升高程度與哇巴因濃度以及孵育時間具有量效關(guān)系。
　　 結(jié)論：1nmol/L與10nmol/L的哇巴因可促進白血病細胞株B95、Meg01增殖，增殖效應(yīng)與哇巴因濃度與孵育時間具有量效關(guān)系。哇巴

4、因促白血病細胞增殖效應(yīng)可能與鈉鉀ATP酶α1 亞單位有關(guān)，它能通過與哇巴因結(jié)合調(diào)節(jié)多種不同來源白血病細胞株的增殖。
　　 第二部分：哇巴因調(diào)節(jié)白血病細胞增殖的信號通路研究
　　 目的：強心甾類固醇（CTS）能與鈉鉀ATP酶特異性結(jié)合，激活細胞內(nèi)一系列信號級聯(lián)反應(yīng)，調(diào)節(jié)細胞的增殖分化與凋亡。本研究以不同來源的白血病細胞株作為研究對象，通過觀察不同濃度的哇巴因與特異性信號通路抑制劑對白血病細胞株增殖的影響，進一步探討白血病的

5、發(fā)病機制、鈉鉀ATP酶的信號傳導(dǎo)功能以及相關(guān)信號通路在白血病發(fā)病中的作用。
　　 方法：采用MTT方法檢測不同濃度的哇巴因（1nmol/L、10nmol/L）以及與c-Src激酶抑制劑PP2、MEK 抑制劑PD98059 聯(lián)用對多種白血病細胞增殖的影響，RT-PCR與Western-blot檢測白血病細胞株鈉鉀ATP酶α1 亞單位表達的變化情況。
　　 結(jié)果：1nmol/L、10nmol/L的哇巴因均可促進急性淋巴細胞白

6、血病細胞株Jhhan與巨核系白血病M07e細胞株的增殖，并使白血病細胞的鈉鉀ATP酶α1 亞單位表達升高。PP2、PD98059可不同程度抑制哇巴因?qū)Π籽〖毎甑拇僭鲋匙饔靡约敖档外c鉀ATP酶α1 亞單位的表達。
　　 結(jié)論：鈉鉀ATP酶具有重要的信號傳導(dǎo)功能，它能通過特異性結(jié)合哇巴因激活多種信號通路調(diào)節(jié)白血病細胞的增殖。哇巴因促進白血病細胞增殖效應(yīng)與Src 激酶、MAPK等信號通路活化有關(guān)。
　　 第三部分：Bcl-

7、2基因家族參與哇巴因誘導(dǎo)白血病細胞增殖的研究
　　 目的：本研究通過檢測哇巴因?qū)Π籽〖毎闎95、Meg01增殖的調(diào)節(jié)作用，探討B(tài)cl-2基因家族在此過程中的作用。
　　 方法：采用MTT法檢測不同濃度的哇巴因（1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L）對白血病細胞株B95、Meg01增殖率的影響，RT-PCR與Western-Blot 分別檢測白血病細胞中Bcl-2、Bcl-XL、Bax基因的mRNA表達