ΙκΒα-,32-36A-基因抑制NF-κB對(duì)白血病細(xì)胞抗凋亡基因表達(dá)及化療敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文ΙκΒα基因抑制NFκB對(duì)白血病細(xì)胞抗凋亡基因表達(dá)及化療敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名：曹文靜申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：血液內(nèi)科指導(dǎo)教師：張瑤珍2001.4.1華中科或丈學(xué)周濟(jì)犀學(xué)魔博士掌芷糟發(fā)源性IxBd條帶的前方。提示：IxBd。。n基因成功導(dǎo)入HL一60細(xì)胞并建立了IKBa：：m一穩(wěn)定高表達(dá)的細(xì)胞株HL一60I。廣一2、抑制NF—KB活化對(duì)化療藥誘導(dǎo)HL一60細(xì)胞基因表達(dá)及凋亡的影響；，『為了觀(guān)察化療藥物

2、是否能誘導(dǎo)NF—KB的活化，不同濃度的TNF～Q、柔紅霉素(DNR)和足葉乙甙(VP16)作用于HL一60細(xì)胞和HL一601細(xì)胞4h，間接免疫熒光染色顯示，NFKB中的RelA亞基在靜止的HL一60細(xì)胞表達(dá)于胞漿，而在藥物作用后易位至胞核。凝膠遷移率變動(dòng)試驗(yàn)結(jié)果表明，TNFQ、DNR和vP—16呈劑量依賴(lài)性誘導(dǎo)HL一60細(xì)胞NF—KB的核轉(zhuǎn)位激活，VP—16激活NF—KB的最小濃度為1ug／ml。在親代細(xì)胞，誘導(dǎo)NF—KB的DNA結(jié)合活

3、性非常強(qiáng)，而在穩(wěn)定表達(dá)IKBⅡ。。。蛋白的HL60I細(xì)胞中，NF—KB的DNA結(jié)合活性被明顯抑制。IKBⅡ。。。幾乎可以完全抑制lOng／mlTNF—Q、1uMDNR和10ug／mlVP一16誘導(dǎo)的NF—KB活化。非標(biāo)記探針的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)證實(shí)了NF—KB激活的特異性。與NF—KB活化對(duì)應(yīng)的是內(nèi)源性IKBn的降解。上述結(jié)果提示：NF—KB是化療誘導(dǎo)性轉(zhuǎn)錄因子，在體外有效作用濃度范圍內(nèi)，NF—KB激活呈劑量依賴(lài)性，而IKBa。，。可以有效抑

4、制NF—KB的誘導(dǎo)激活。為進(jìn)一步探討NF—KB活化過(guò)程中活性氧中間產(chǎn)物(reactionoxygenintermediates，ROI)所起的作用，采用EMSA觀(guān)察抗氧化劑吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(Pyrrolidinedithiocarbamate，PDTC)對(duì)DNR、VP一16誘導(dǎo)的NF—KB活性的影響。結(jié)果表明，PDTC以劑量依賴(lài)方式抑制DNR和VP一16誘導(dǎo)的NF—KB活化a1001JM的PDTC能完全抑制NF—KB的活化。結(jié)果提