靶向siRNA沉默Ets2基因?qū)θ思毙詥魏思?xì)胞白血病細(xì)胞株SHI-1化療敏感性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、【目的】研究靶向小干擾RNA(siRNA）對人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株SHI-1中Ets2基因表達(dá)的沉默作用及其對SHI-1 細(xì)胞化療敏感性的影響及Ets2基因在白血病患者中的表達(dá)情況。
　　 【方法】1.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測28例初治白血病患者骨髓標(biāo)本和SHI-1 細(xì)胞中Ets2的表達(dá)情況，取5例體檢為正常人外周血標(biāo)本做為對照。2.設(shè)計(jì)、篩選和體外化學(xué)合成3 對針對Ets2基因mRNA的siRNA(E

2、ts2 siRNA-1，Ets2siRNA-2和Ets2 siRNA-3），用電穿孔方法轉(zhuǎn)染SHI-1 細(xì)胞，以未轉(zhuǎn)染siRNA的細(xì)胞及轉(zhuǎn)染非特異性的siRNA 細(xì)胞作對照；同時(shí)轉(zhuǎn)染帶有綠色熒光蛋白（FAM）的載體作為陽性對照，流式細(xì)胞術(shù)檢測其綠色熒光以確定轉(zhuǎn)染效率；實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time PCR）法檢測Ets2 mRNA的抑制效應(yīng)；FITC 標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V/碘化丙錠（Annexin V-FITC/PI）雙染色流式細(xì)胞

3、術(shù)檢測靶向siRNA 沉默Ets2基因后細(xì)胞的凋亡和對VP-16 誘導(dǎo)SHI-1 細(xì)胞凋亡的影響。
　　 【結(jié)果】1.SHI-1 細(xì)胞中Ets2基因高表達(dá)；28例初治白血病患者中,21例患者骨髓中擴(kuò)增出Ets2基因，表達(dá)率明顯高于對照組(p=0.033)。ANLL 患者Ets2表達(dá)率為73.68％，ALL 為60％，健康對照組表達(dá)率為10％。未發(fā)現(xiàn)Ets2表達(dá)與性別、年齡、ANLL分型、外周血白細(xì)胞、血紅蛋白和血小板水平相關(guān)。2

4、.Ets2 siRNA-3 可顯著抑制SHI-1 細(xì)胞Ets2 mRNA表達(dá)，這種抑制作用在沉默48h后最明顯，mRNA表達(dá)水平下降約30％。Ets2 siRNA-1 可使Ets2 mRNA表達(dá)程度下降約10％而Ets2 siRNA-2沉默效應(yīng)不明顯。3.Ets2基因沉默后細(xì)胞凋亡率可在一定程度上增加（P=0.0001），且對VP-16 誘導(dǎo)SHI-1 細(xì)胞凋亡有促進(jìn)作用（P=0.004）。
　　 【結(jié)論】Ets2 轉(zhuǎn)錄因子在白