鐵剝奪對白血病細(xì)胞多藥耐藥性的影響及與NF-κB關(guān)系的研究.pdf

1、研究背景及目的：多藥耐藥(MultidrugResistance，MDR)的形成是白血病化療失敗、復(fù)發(fā)的重要原因。對MDR產(chǎn)生機(jī)制及克服方法的研究已成為近年來白血病研究的熱點(diǎn)。在MDR產(chǎn)生機(jī)制中，以多藥耐藥基因MDR1及其編碼的P-糖蛋白(Pgp/P170)的高表達(dá)研究最為深入。在多數(shù)腫瘤細(xì)胞(包括急慢性白血病細(xì)胞)中均有核因子κB(NF-κB)的異常表達(dá)，并且許多可誘導(dǎo)MDR基因急性表達(dá)的因素(如化療藥物、離子輻射等)，同時(shí)也是NF-

2、κB的強(qiáng)誘導(dǎo)劑，但目前對NF-κB與MDR1基因之間的相互關(guān)系還不是很清楚。鐵是維持機(jī)體正常生命活動(dòng)的重要元素，已被證實(shí)惡性腫瘤患者體內(nèi)鐵代謝紊亂，白血病細(xì)胞內(nèi)鐵蛋白水平和轉(zhuǎn)鐵蛋白受體表達(dá)均較正常造血細(xì)胞明顯升高。鐵鰲合聯(lián)合化療藥物能明顯增加白血病細(xì)胞對化療藥物的敏感性。本研究采用人白血病細(xì)胞株K562作為研究對象，通過對多藥耐藥基因MDR1轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平及NF-κB活性檢測，探討化療藥物在白血病細(xì)胞多藥耐藥形成中的作用及其可能

3、的機(jī)制，探討鐵鰲合對此過程的影響及其與NF-κB的關(guān)系，以期為臨床上逆轉(zhuǎn)或降低白血病細(xì)胞的多藥耐藥性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：以人白血病細(xì)胞株K562為研究對象，實(shí)驗(yàn)分三部分進(jìn)行，即：1、采用RT-PCR法和流式細(xì)胞分析技術(shù)分別檢測不同濃度柔紅霉素對K562細(xì)胞作用不同時(shí)間后，其MDR1mRNA和P-gp表達(dá)水平的變化。2、采用RT-PCR法和免疫組織化學(xué)法檢測柔紅霉素對K562細(xì)胞MDR1mRNA表達(dá)以及NF-κB活性的影響。3、

4、以同樣的方法檢測去鐵胺或三氯化鐵聯(lián)合柔紅霉素對K562細(xì)胞MDR1mRNA、P-gp表達(dá)以及NF-κB活性的影響。 結(jié)果：1、柔紅霉素誘導(dǎo)K562細(xì)胞MDR1mRNA和Pgp表達(dá)增加，在所觀察的實(shí)驗(yàn)周期內(nèi)呈時(shí)間劑量依賴性。2、柔紅霉素誘導(dǎo)K562細(xì)胞NF-κB的活化，隨柔紅霉素作用時(shí)間的延長活化程度增加。3、柔紅霉素誘導(dǎo)NF-κB活化后很快便出現(xiàn)MDR1mRNA表達(dá)上調(diào)，二者變化趨勢一致。4、鐵剝奪后可抑制柔紅霉素誘導(dǎo)的NF-κ

5、B的活化，而三氯化鐵的作用則與之相反。5、鐵剝奪后可抑制柔紅霉素誘導(dǎo)的MDR1mRNA和P-gp的表達(dá)，而三氯化鐵的作用與之相反。 結(jié)論：1、柔紅霉素可誘導(dǎo)K562細(xì)胞MDR1mRNA和P-gp表達(dá)上調(diào)，且呈時(shí)間劑量依賴性，可能與轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化有關(guān)。2、鐵剝奪可抑制柔紅霉素誘導(dǎo)的K562細(xì)胞MDR1mRNA和P-gp表達(dá)上調(diào)，可能是鐵剝奪后柔紅霉素引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)減弱，抑制了轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活化，進(jìn)而抑制了MDR