S100A8對白血病細胞自噬和耐藥性影響的研究.pdf

1、目的:探討人S100鈣結(jié)合蛋白A8(human S100 calcium bindingprotein A8，S100A8)對自噬的影響和白血病細胞耐藥性影響的研究。
　　方法:本研究首先收集近3年本院診斷的急性白血病患兒的骨髓單個核細胞(Bone Marrow Mononuclear Cells，BMMCs)及血漿標本，通過酶聯(lián)免疫吸附測定（enzyme-linked immuno sorbentassay，ELISA)和蛋白印

2、跡法(Western Blotting，WB)檢測S100A8蛋白的表達情況;同時選用不同的白血病細胞株，噻唑藍(MTT)法檢測其半數(shù)抑制濃度(50％ concentration of inhibition，IC50)，得出不同細胞株對化療藥物的耐藥程度，采用Realtime PCR、WesternBlotting方法檢測S100A8在不同白血病細胞株的表達情況，探討S100A8與白血病細胞化療耐藥性的關(guān)系;同時通過基因轉(zhuǎn)染、RNAi技

3、術(shù)、Western Blotting、Realtime PCR、透射電鏡及MTT方法等方法檢測S100A8是否通過調(diào)節(jié)白血病細胞的自噬影響其化療耐藥性。
　　結(jié)果:
　　①發(fā)現(xiàn)初治/復(fù)發(fā)組明顯高于完全緩解組、正常對照組（*P＜0.05）。
　?、诨熕幬锟墒拱籽〖毎腟100A8表達增高(n=3，P＜0.05)。
　?、跾100A8在白血病耐藥株(HL-60/ADR、K562/AO2)中的表達較非耐藥細胞株（K

4、562、HL-60和Jurkat）顯著增高(n=3，P＜0.05)。
　?、芤种芐100A8表達，可以使化療藥物處理后的白血病細胞存活率下降，使細胞凋亡率增加;同時，抑制 S100A8后P62表達上調(diào)而LC3-Ⅰ/Ⅱ表達下調(diào)，透射電鏡進一步說明自噬受到抑制;
　?、萆险{(diào)S100A8表達能促進自噬泡的形成，增加LC3-Ⅱ、Beclin1表達及降低P62的表達。此外，沉默K562細胞中PI3KC3、Beclin1，Atg7的表達