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文檔簡介
1、目的:探討葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶(glucosylceramidesynthase,GCS)在白血病細(xì)胞的耐藥形成過程中是否經(jīng)過細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)通路來影響P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表達(dá)。
方法:應(yīng)用RNA干擾技術(shù)和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù),觀察針對(duì)GCS的siRNA(GCSsiRNA)及ERK特異性化學(xué)抑制劑U012
2、6分別作用于白血病耐藥細(xì)胞株K562/A02細(xì)胞后,在不同的情況下MDR1mRNA的表達(dá)情況;同時(shí)應(yīng)用Westernblot印跡分析方法檢測(cè)經(jīng)轉(zhuǎn)染GCSsiRNA后細(xì)胞中ERK1/2(extracellularsignal-regulatedkinase1/2)蛋白的磷酸化及非磷酸化的表達(dá),及各組中P-gp的表達(dá)水平。
結(jié)果:與空白對(duì)照組比較,當(dāng)ERK抑制劑U0126的濃度為10μmol/L時(shí),對(duì)磷酸化ERK1/2(pho
3、sphorylated-ERK1/2,P-ERK1/2)沒有明顯抑制,P-gp表達(dá)亦沒有明顯差別;而隨著U0126濃度的逐漸升高,即20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L時(shí)對(duì)P-ERK1/2的抑制則呈濃度依賴性增強(qiáng),同時(shí)P-gp的表達(dá)水平亦被明顯下調(diào)。RNA干擾實(shí)驗(yàn)顯示:GCSsiRNA實(shí)驗(yàn)組的GCSmRNA表達(dá)被明顯抑制,抑制率為70.50%(58.00%~76.00%);與陰性干擾對(duì)照組比較,GCSsiRNA實(shí)驗(yàn)組在s
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