NF-κB介導白血病多藥耐藥細胞中葡萄糖神經酰胺合成酶對P-糖蛋白的調節(jié)作用.pdf

1、目的：探討在白血病耐藥細胞K562/A02中核因子κB（nuclear transcription factor-kappaB,NF-κB）是否參與葡萄糖神經酰胺合成酶（glucosylceramide synthase,GCS）對P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）的調節(jié)作用，及研究NF-κB與ERK（extracelluar signal-regulated kinase,ERK）在該調節(jié)作用信號通路中的相互關系。<

2、br>　　方法：使用特異性的GCS小干擾RNA（GCS small interfering RNA,GCSsiRNA）抑制GCS基因后，實時熒光定量PCR方法檢測靶基因抑制率以及對多藥耐藥蛋白1（multidrug resistance protein1,MDR1）mRNA表達水平的影響；同時應用Western印跡檢測各種蛋白的表達情況。使用NF-κB的特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbama

3、te,PDTC）抑制NF-κB后，應用Western印跡檢測P-gp的表達情況。采用U0126抑制磷酸化ERK（phosphorylated-ERK，P-ERK）后，Western印跡檢測細胞核內以及總的NF-κB p65和P-gp的表達。
　　結果：GCSsiRNA轉染48h后，GCSmRNA的表達被抑制，抑制率為62%（51%-73%），同時下調MDR1 mRNA的表達，抑制率為52%（43%-61%），與陰性干擾對照組比較，

4、均具有顯著性差異（P＜0.05）；GCSsiRNA轉染72h后，實驗組細胞核內NF-κB p65及P-ERK的表達水平均明顯下調（P＜0.05），同時對P-gp的表達亦出現(xiàn)顯著的抑制作用（P＜0.05）。此外實驗結果還顯示：
　　（1）與對照組比較，80μmol/L NF-κB的抑制劑PDTC處理K562/A02細胞24h后及20μmol/L的PDTC處理48h后，對P-gp皆有明顯的抑制作用（P＜0.05）；
　　（2）2