葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶基因在人耐多柔比星乳腺癌細(xì)胞株MCF-7-ADR中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的： 研究葡萄糖神經(jīng)酰胺合成酶(GCS)基因在人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7和人耐多柔比星乳腺癌細(xì)胞株MCF-7/ADR中的表達(dá)及意義；探討GCS與P-糖蛋白表達(dá)水平以及功能之間的關(guān)系。 方法： 采用四甲基偶氮唑鹽(MTD法檢測(cè)多柔比星對(duì)MCF-7/ADR、MCF-7的抑制率和IC50，用濃度為51amol/L、10μmol/L、20μmol/L的GCS抑制劑D，L-threo-1-phenyl-2-decanoyl

2、-amino-3-morpholino-1-propanol(PDMP)預(yù)處理MCF-7/ADR 24h、48h后檢測(cè)多柔比星對(duì)其抑制率和IC50；運(yùn)用流式細(xì)胞檢測(cè)術(shù)(FCM)檢測(cè)MCF-7及PDMP處理前后MCF-7/ADR細(xì)胞中P-gP、GCS蛋白的表達(dá)水平；運(yùn)用FCM檢測(cè)不同濃度的PDMP預(yù)處理MCF-7/ADR 48h后，細(xì)胞內(nèi)多柔比星的潴留量并拍攝熒光照片；應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(Real timeRT-PCR)檢

3、測(cè)MCF-7以及PDMP作用前后MCF-7/ADR細(xì)胞中GCSmRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果： MCF-7/ADR對(duì)MCF-7的耐藥倍數(shù)為22.69倍，PDMP預(yù)處理后多柔比星對(duì)MCF-7/ADR的抑制率升高，IC50下降(P<0.05)；MCF-7/ADR中GCS和P-gp的表達(dá)水平均高于MCF-7(P<0.001)，PDMP使MCF-7/ADR中GCS蛋白和mRNA表水平均下降(P<0.05)，對(duì)P-gP蛋白表達(dá)水平無(wú)明

4、顯影響(P>0.05)。FCM定量檢測(cè)及熒光照片定性檢測(cè)顯示，不同濃度的PDMP預(yù)處理MCF-7/ADR 48h后，可使多柔比星在其內(nèi)潴留量不同程度增多。 結(jié)論： GCS可能參與惡性腫瘤耐藥的發(fā)生過(guò)程，并在MCF-7/ADR多藥耐藥中起重要作用，在多藥耐藥表型中GCS與P-gp有一定關(guān)系；PDMP不影響P-gp蛋白的表達(dá)水平，但能影響其功能，PDMP能比較有效的逆轉(zhuǎn)人耐多柔比星乳腺癌細(xì)胞株MCF-7/ADR對(duì)多柔比星的耐