姜黃素對(duì)卵巢癌細(xì)胞株HO-8910增殖和轉(zhuǎn)移作用的研究.pdf

1、目的：探討姜黃素(Curcumin，Cur)對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移的影響，為臨床用藥提供科學(xué)依據(jù)。 方法：①體外培養(yǎng)卵巢癌細(xì)胞株HO-8910。②采用MTT方法檢測(cè)對(duì)照組、不同濃度(5、10、20、30、40、50、60umol/ml)Cur干預(yù)組(干預(yù)24、48、72、96小時(shí))吸光值，計(jì)算細(xì)胞抑制率值。③應(yīng)用光學(xué)顯微鏡觀察不同組之間、不同時(shí)間點(diǎn)卵巢癌細(xì)胞形態(tài)改變。④利用RT-PCR技術(shù)與免疫細(xì)胞化學(xué)方法分別檢測(cè)小劑量藥物濃度

2、Cur(1、5、10、20umol/ml)干預(yù)24小時(shí)后基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinases-2，MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinases-9，MMP-9)基因在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的表達(dá)以及其抑制物基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2(tissueinhibitorofmetalloproteinase-2，TIMP-2)在翻譯水平的表達(dá)，與對(duì)照組進(jìn)行比較。 結(jié)果：1、光

3、學(xué)顯微鏡觀察顯示：隨著姜黃素濃度的增高，卵巢癌細(xì)胞株形態(tài)逐漸發(fā)生變化，透光性及折光性降低，細(xì)胞皺縮，細(xì)胞數(shù)量減少，凋亡細(xì)胞增多。2、MTT結(jié)果顯示：隨著姜黃素濃度的增高，卵巢癌細(xì)胞OD570的值降低，提示細(xì)胞活力逐漸降低，即細(xì)胞抑制率增加。72小時(shí)內(nèi)呈時(shí)間、濃度依賴性特點(diǎn)。在同一濃度組內(nèi)，72小時(shí)時(shí)抑制率達(dá)高峰，96小時(shí)的細(xì)胞抑制率下降。不同濃度姜黃素與不同時(shí)間組之間均有顯著性差異(P＜0.01)。3、免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果顯示不同濃度姜黃素

4、培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞，隨著藥物濃度增高，細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，TIMP-2表達(dá)逐漸增強(qiáng)，MMP-2及MMP-9表達(dá)逐漸減弱。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。4、RT-PCR結(jié)果顯示不同濃度姜黃素培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞，隨著藥物濃度增高，MMP-2及MMP-9mRNA表達(dá)逐漸減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 結(jié)論：1、姜黃素能有效抑制人卵巢癌細(xì)胞株HO-8910體外增殖，72小時(shí)內(nèi)呈時(shí)間、濃度依賴性特點(diǎn)。在同一濃度組內(nèi)，72小時(shí)時(shí)抑制

5、率達(dá)高峰，96小時(shí)的細(xì)胞抑制率下降。40umol/l姜黃素作用24小時(shí)后細(xì)胞抑制率達(dá)51.75％。2、結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)及RT-PCR，分析卵巢癌HO-8910細(xì)胞株于姜黃素干預(yù)后的MMPs改變，提示MMP-2、9表達(dá)下調(diào)及TIMP-2表達(dá)上調(diào)，說明姜黃素可下調(diào)MMPs的表達(dá)及調(diào)節(jié)MMPs/TIMPs的平衡，這些可能與姜黃素抑制卵巢癌細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移能力有關(guān)。3、說明姜黃素抑制卵巢癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移的機(jī)制十分復(fù)雜，作用靶點(diǎn)可以從DNA到mRNA